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おおさんコメントありがとうございます 削除/引用 No.1689-3 - 2009/12/05 (土) 11:20:59 - actin コントロールや予備実験として 重合阻害剤や、脱重合剤で処理した細胞を用いてみては？ ということですよね。 もう少し、コメントを待ちつつ、検討してみます。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.1689-2 - 2009/12/05 (土) 11:00:14 - おお 方法論的にはコメントできるような経験はありませんが、 レスもつかないようですし、ちょっと思いつきですが、 たしにでもなればと、、、 アクチン重合阻害剤で処理した細胞とかでG-アクチンフラクション が増えるかどうかとかどうでしょうか?

培養細胞のF-アクチンとG-アクチンの分離(ウエスタン用) 削除/引用 No.1689-1 - 2009/12/04 (金) 22:08:31 - actin F-アクチンとG-アクチンを分離しウエスタンブロットをしています。 6cmdishで培養した細胞を回収、 以下の組成のエクストラクションバッファー250μlで懸濁、 RT、15min、処理し、 遠心後、上清をG-アクチン、ペレットをF-アクチンとしています。 G-アクチンの発現がとても弱く、確実に分離されているのか不安です。 この方法での注意点や、より良い分離方法など、 コメントをよろしくお願いします。 エクストラクションバッファー 0.1% NP-40 5mM　KH2PO4 27mM Na2HPO4(pH7.2) 2mM　MgSO4 2mM　EGTA 0.2mM ATP 0.5mM DTT 2M グリセロール 全体の1/10量のプロテアーゼインヒビター 参考論文 ・Keratinocyte growth factor down-regulates intracellular ROS production induced by UVB ・State of actin in gastric parietal cells. Am J Physiol

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