全4件 ( 1 〜 4 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.1677-4 - 2009/12/05 (土) 03:16:32 - Boston 共染色したい１次抗体とそれに対する２次抗体を最初に反応させて、 ホルマリンにて抗原／１次抗体／２次抗体を架橋します。そのあと、HCl 処理ー＞BrdU 染色で問題なくきれいに共染色できますよ。

(無題) 削除/引用 No.1677-3 - 2009/12/04 (金) 14:02:39 - med 情報ありがとうございます。 早速試してみようと思います。 MeOHが使えたらまた報告します。

(無題) 削除/引用 No.1677-2 - 2009/12/04 (金) 12:35:48 - 通りすがり >molecular probesのEdU imaging kitで細胞の分裂を見られた方いらっしゃい >ま?すか？BrdUだとHCl処理するため、２重染色等をするとき、抗体によっては >染まらないことがあり、このキットを使おうと思ってます。 現在マウスの皮膚の研究でこのキットを使用していますが、 今までBrdUで二重染色に苦労していたのが信じられないほど うまくできてます。 ほとんど条件設定もしないでもマニュアル通りでやって 成功すると思います。 感度自体もこれまでのBrdU-antiBrdUのシステムで 行っていた場合と比べて高い印象です。 （間にbiotinとかで増幅してるのに比べると劣るかもしれませんが） ただ欠点として高濃度や長期的に追跡する場合 毒性があります。 embryoや弱齢マウスで投与後数日 経過すると明らかに奇形や発生異常が起きる感じがありますし 培養細胞でもアポトーシスみたいなのがおきますね。 そのあたりを考慮して使用しないといけないかと思います。 >whole mountでembryoをラベルをした後、PFA等で固定し、 >MeOHで一度保存しようと思ってるのですが、 >どなたか同じような実験をされてる方いらっしゃいますか？ 自分の場合、embryo, adultどちらでも10%ホルマリン→パラフィン包埋 および4%PFA固定→OTC包埋のいずれでも成功してます。 MeOH保存については試したことはありませんが パラフィン包埋の途中でエタノールでのかなりハードな 脱水処理を経ているはずなので アルコール類による影響はある程度ならあまりないと思いますので 大丈夫でないでしょうか。 心配な場合メーカーのサポートデスクに相談されても良いかもしれません。

Click-iT EdU imaging kit 削除/引用 No.1677-1 - 2009/12/03 (木) 18:22:34 - med molecular probesのEdU imaging kitで細胞の分裂を見られた方いらっしゃいますか？ BrdUだとHCl処理するため、２重染色等をするとき、抗体によっては染まらないことがあり、このキットを使おうと思ってます。 そこで、このキットを使ったときの固定法について質問です。 whole mountでembryoをラベルをした後、PFA等で固定し、MeOHで一度保存しようと思ってるのですが、 どなたか同じような実験をされてる方いらっしゃいますか？

全4件 ( 1 〜 4 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

---