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(無題) 削除/引用 No.1665-5 - 2009/12/05 (土) 09:21:57 - 脂肪 toyoさん ありがとうございます。 乗り換えたいのですが、何故かうちのラボには3T3-L1は無くて・・・ 色々検討する余地はあるので、頑張ってみたいと思います。

(無題) 削除/引用 No.1665-4 - 2009/12/04 (金) 02:34:06 - toyo 分化誘導効率を向上させるなら、という意図で書いたのですが、 舌足らずなコメントをしてしまってすみません。 細胞がはがれてしまうのが問題なら、dishをコートしてみたり、 培地交換の方法を変えてみるなどの一般的な対策を試してみては いかがでしょうか。 3T3-L1の場合、培地交換の際の水流か乾燥によって細胞が剥がれ やすい傾向が見られましたので、IDXによる誘導開始後2日目の、 細胞が特に剥がれやすいころの培地交換には気を使いました。 3T3-F442AをDMI法で分化させている報告は一応あるようですね。 また、Troglitazone単体で分化させている報告もあるようです。 http://www.jbc.org/content/273/44/28945.full また細胞の使用用途によっては、100%の分化誘導効率が得られなく てもよい場合もあると思いますが、その辺りはいかがでしょうか。 あとは過去ログ検索とか･･･ http://www.kenkyuu.net/cgi-biotech/biotechforum.cgi?mode=view;start=1;Code=2255 他にも3T3-L1をキーワードとして検索してみると、参考になる かもしれないスレッドが見つかると思います。 3T3-L1ならこの掲示板にもほかに何人か経験者がいらっしゃる ようですが、私自身は3T3-F442Aを使用した経験がありませんので、 これ以上はどなたか詳しい方の登場を願いたいと思います。 ･･･いっそのこと、3T3-L1に乗り換えてみるのはいかがでしょうか?(汗 DMI+Troglitazoneでかなり高効率に分化誘導ができると思います。 >ちなみに何で3T3-L1と3T3-F442Aは使い分けられるんですかね？ >分化しやすい方はF442A細胞なのに、何でL1細胞の方がよく使われるんでしょうか？ この質問に対する回答も私は持ち合わせていませんので、どなたか 詳しい方の登場を待ちたいと思います。

(無題) 削除/引用 No.1665-3 - 2009/12/03 (木) 04:47:02 - 脂肪 ＞toyoさん アドバイスありがとうございます。 チアゾリジン誘導体の添加もやってみたいと思います。 ただ、IBMXの添加で細胞がかなり剥がれてしまうので、3T3-L1で使われるDMI法は3T3-F442A細胞ではあまり適当ではないかと思うのですが・・・

(無題) 削除/引用 No.1665-2 - 2009/12/02 (水) 10:37:34 - toyo 3T3-F442Aは扱ったことがありませんが、IDXに加えて Troglitazoneを添加してみるのはどうでしょうか。 以前私が行っていた3T3-L1では分化誘導効率が上昇しました。

3T3-F442Aの分化誘導がうまくいきません 削除/引用 No.1665-1 - 2009/12/02 (水) 07:13:39 - 脂肪 3T3-F442A細胞を用いて脂肪細胞への分化誘導試験を行っているのですが、なかなかうまくいきません。 分化誘導開始してから１０日後でパッと見た感じでだいたい５０〜６０％くらいです。 分化誘導条件は、コンフルエントになってから２日後に5ug/mlのインスリンを含んだ10%FBS/DMEMに交換して、以後２日毎に培地交換しました。 3T3-L1細胞で用いられるＩＢＭＸ、インスリン、デキサメタゾンの方法でもやってみましたが、細胞が剥がれてしまってダメでした。 うまくいく方法があればお教え頂けないでしょうか？ P.S.　ちなみに何で3T3-L1と3T3-F442Aは使い分けられるんですかね？ 分化しやすい方はF442A細胞なのに、何でL1細胞の方がよく使われるんでしょうか？

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