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(無題) 削除/引用 No.1656-7 - 2009/12/07 (月) 16:07:31 - もたろう 中年様 大変勉強になりました。一つ謎が解決致しました。ありがとうございました。 1は解決致しましたので引き続き 「２. 使用するpolymeraseをpfu以外（pfxとかprimestarとか、、、）で試された方はいらっしゃるでしょうか？ →肝はTaq DNA ligaseが概bufferで動くか、もちろんpolymeraseも0.5xのTaq DNA ligase bufferで動くかというところだと思いますが、、、。」 についての情報をお持ちの方宜しく御願い致します。

(無題) 削除/引用 No.1656-6 - 2009/12/07 (月) 15:48:37 - 中年 そのとおりです。 pBluescriptなどのプラスミドをhelperファージを掛けてssDNAにしたものは、フェノール抽出などでファージのコートを外してssDNAだけになったものでも、ファージのポリメラーゼを持たないDH5alphaなどの株を形質転換することができます。dsDNAに比べると効率は低いかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.1656-5 - 2009/12/07 (月) 15:35:00 - もたろう 中年様、レスポンスありがとうございました。 それはM13とファージを用いる方法ではなくて、一般的なクローニング用のプラスミドとDH5alpha等の一般的な大腸菌でもでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.1656-4 - 2009/12/07 (月) 15:28:07 - 中年 mutagenesisのプロトコルについてはさておき、ssプラスミドが形質転換能があるか否かということに関しては、あります。

(無題) 削除/引用 No.1656-3 - 2009/12/07 (月) 15:24:31 - もたろう レスポンスお待ちしております。

(無題) 削除/引用 No.1656-2 - 2009/12/02 (水) 11:24:40 - もたろう 引き続き、レスポンスお待ちしております。

MBLやStratageneで販売されているmulti mutagenesis 削除/引用 No.1656-1 - 2009/12/01 (火) 10:55:18 - もたろう MBLやStratageneで販売されているmulti mutagenesisに関して質問があります。 １. ssプラスミドDNAは形質転換可能なのか？ →いわれてみると可能な気もするのですが、一般的に知られていることなのでしょうか、、、。onlineでおとせるマニュアルには書いてありませんでしたし、reference(Swano A et al, Nucleic Acids Res. 2000)はDpn処理後の断片DNAをプライマーとして2本鎖目を合成しているので、、、、。 ２. 使用するpolymeraseをpfu以外（pfxとかprimestarとか、、、）で試された方はいらっしゃるでしょうか？ →肝はTaq DNA ligaseが概bufferで動くか、もちろんpolymeraseも0.5xのTaq DNA ligase bufferで動くかというところだと思いますが、、、。 実際に試されている方がいらっしゃいましたらコメントを頂ければ幸いです。

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