Bio Technical フォーラム

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ゲノム上のコピー数の定量 トピック削除
No.1640-TOPIC - 2009/11/27 (金) 17:00:40 - copy
トランスジェニックではいったトランスジーンのコピー数を知りたくて、syber greenを用いたreal-time PCRで調べようと考えてます。
その際、ゲノム上に2コピーあるもの、1コピーあるものと比較するのでいいのでしょうか？
どなたか同じような実験をされた方いらっしゃいますか？
　
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(無題) 削除/引用
No.1640-2 - 2009/11/27 (金) 18:06:50 - ザンギ
同じような実験をしたことはありませんが．．．

定量PCRはターゲット分子以外のDNAが大量にあると検出限界が高くなりますので、
ゲノム上の1コピーとか2コピーとかの正確に定量は難しいです。

トランスジェニックの作出に使ったプラスミドの希釈シリーズと、野生株の
ゲノムDNA濃度を被検体と揃えたものを混ぜて検量線を作るといいように思い
ます。

ゲノム上のコピー数の定量 削除/引用
No.1640-1 - 2009/11/27 (金) 17:00:40 - copy
トランスジェニックではいったトランスジーンのコピー数を知りたくて、syber greenを用いたreal-time PCRで調べようと考えてます。
その際、ゲノム上に2コピーあるもの、1コピーあるものと比較するのでいいのでしょうか？
どなたか同じような実験をされた方いらっしゃいますか？
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