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(無題) 削除/引用 No.1633-2 - 2009/11/26 (木) 21:17:29 - 低分子 RIPAバッファーと20Kdaくらいのタンパク質のウエスタンで苦労したことがあります。 当方、SDSサンプルバッファーでボイル後、-20℃で保存していますが 長期保存すると特に低分子の検出感度が落ちるようです。 （もしかしたら凍結融解や再ボイルが悪かったのかもしれません） しかし、NP40バッファーでは比較的悪影響は少ないように感じました。 RIPAは核内タンパク質向けの強い可溶化剤と聞きます。 NP40バッファーも検討してみてはどうでしょうか。

細胞溶解液はストックできない？アクチンが壊れていく。。 削除/引用 No.1633-1 - 2009/11/26 (木) 18:46:23 - LYSATEの取り扱い はじめまして、 このたび、接着細胞で発現するタンパクを定量するためlysis bufferで 細胞を溶かし、目的タンパクを複数の細胞株間で比較する為、 比較しようと思ってRIPA buffer(Pierce)とProteinase inhibitor cocktail(sigma)を使用書に従い混合し、細胞を溶かし、 遠心した上清をＢＣＡで定量したのち、-80℃で保存していたのですが、 一旦凍らすとＷＢでアクチンを検出しても検出できませんでした。 もちろん凍らす前は、キレイに検出できていました。 これは、凍結が原因と考えてよいのでしょうか。 原因及び解決法をご存知の方がいらっしゃいましたら 教えていただけますでしょうか。よろしくお願いいたします。

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