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(無題) 削除/引用 No.1601-5 - 2009/11/21 (土) 15:15:22 - み >[Re:4] おおさんは書きました : > えっと、ノックアウトといっても完全に遺伝子丸ごとぬけて > ない場合があります。エクソン1と2を抜いてその後ろは残っているとか、、、 おおさんが仰る説が妥当でしょうね。 蛋白は完全にノックアウトされているが（まあこれをエピトープ次第で一部 断片が認識できる可能性は否定できないが・・・）、TaqMan primerセットでのPCRによるmRNAレベルは逆に高いということですね。 おそらくknockout constractはC末など一部を潰すものであったため、mRNAが完全にnullではなく、頭の部分（またはその他の一部）のmRNAが転写しているのでは？ ノックアウトされているmRNA部分に対するプライマーを作成して、実験をやり直しましょう。

(無題) 削除/引用 No.1601-4 - 2009/11/21 (土) 13:24:46 - おお ゲノムをチェックするプライマーと同じプライマーでしょうか? えっと、ノックアウトといっても完全に遺伝子丸ごとぬけて ない場合があります。エクソン1と2を抜いてその後ろは残っているとか、、、

(無題) 削除/引用 No.1601-3 - 2009/11/21 (土) 12:26:12 - やま ノックアウトしたはずの遺伝子が（コントロールより）発現してたって ことでしょうか？ タンパクレベルでノックアウトを確認されたとの事ですが、 ゲノムレベルでのノックアウトも確認されたのでしょうか？ （つまり、ＤＮＡをとってそのプライマーセットでPCRしてもかからない） DNAでかかるのならそのプライマーセットが特異的でないということなのでは？ と思うのですが。

(無題) 削除/引用 No.1601-2 - 2009/11/21 (土) 08:24:20 - おお >[Re:1] はせがわさんは書きました : > いつもお世話になっております。 > あるプライマーセット（TaqMan）を用いてある遺伝子を解析した結果、コントロールマウスよりもノックアウトマウスのサンプルに高く発現している結果を得ました。 > このマウスでは間違いなくノックアウトされていることをタンパクレベルで確認しています。 > > どうかよろしくお願い致します。 質問の主旨はなんですか?

遺伝子欠損モデルサンプルを用いたPCR 削除/引用 No.1601-1 - 2009/11/21 (土) 07:30:49 - はせがわ いつもお世話になっております。 あるプライマーセット（TaqMan）を用いてある遺伝子を解析した結果、コントロールマウスよりもノックアウトマウスのサンプルに高く発現している結果を得ました。 このマウスでは間違いなくノックアウトされていることをタンパクレベルで確認しています。 どうかよろしくお願い致します。

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