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(無題) 削除/引用 No.1583-7 - 2009/11/20 (金) 15:00:05 - FACS 参考文献まで提示していただきありがとうございます。 一度自分でも凍結前後で比較してみたいと思います。

(無題) 削除/引用 No.1583-6 - 2009/11/19 (木) 23:36:46 - Tb PBMCを凍結の条件検討と影響をみた報告として、 J Immunol Methods. 2006 Jan 20;308(1-2):13-8. Maximizing the retention of antigen specific lymphocyte function after cryopreservation. [PMID: 16337957] をみつけました。解凍したあとの遠心時に入れるメディウムの温度がけっこう影響するようです。 ところで、 Frequency of human T regulatory cells in peripheral blood is significantly reduced by cryopreservation [PMID: 19538964] と Cryopreservation does not alter the frequency of regulatory T cells in peripheral blood mononuclear cells.[PMID: 19919839] のように相反する話もあるので、やはり凍融解の影響の有無については自分の系で確認した方がよいと思います。

(無題) 削除/引用 No.1583-5 - 2009/11/19 (木) 20:57:33 - POM 私も今後FACSで骨髄の単核細胞をFACS（SPなど）を試みる予定です。 培養している限りでは、私はセルバンカーのみで保存していますが、セルバンカーの使用書通り100,000cells/mlで保存すると、コロニー形成率はかなり落ちましたが、10,000,000cells/mlで保存してみると、保存前とコロニー形成率はほとんど変わりませんでした。DMSO＋FBSなども条件検討してみましたが、細胞濃度を上げたほうが生存率は高い印象です。思い切って細胞濃度を上げてみるとよいかもしれません。あくまで、コロニー形成率のみからの話ですが。

(無題) 削除/引用 No.1583-4 - 2009/11/19 (木) 13:23:41 - FACS emaさん、通りすがりさんお返事ありがとうございます。 やはり細胞はそれなりに死ぬんですね。 余った細胞をlysateしてPCR用に保存してるのですが、後のFACS用として保存しても参考程度にしておいた方がよいということですね。 細胞質内サイトカイン染色も大分産生は落ちるのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.1583-3 - 2009/11/19 (木) 11:44:27 - 通りすがり 私のところでは10% DMSO FCSで凍結しています。すなわちFCSだけで。 活性や細胞表面抗原の発現が若干落ちることがあるので、それでも良い実験にしか使いません。

普通の凍結方法 削除/引用 No.1583-2 - 2009/11/19 (木) 11:07:10 - ema ハイブリドーマとか凍結するのと同じで、DMSOいれるとか、売っている凍結用試薬（セルバンカー等）で大丈夫です。生きている時間も準じます。ロスはする（死んだ細胞結構出る)のですが、そこをみこして。 アメリカでTg mouseを継代してもらっていて、PCR（だとでてる）じゃなく末血の表面抗原発現率がで重要な系のスクリーニング時（ここはPCR以外のスクリーニングはしないっていわれて）上記の条件で輸送してもらっていました。 肝の実験には避けましょう。

細胞の凍結保存 削除/引用 No.1583-1 - 2009/11/18 (水) 06:46:39 - FACS たまに末梢血単核球等を凍結保存されて、後にFACSをかけたり解析されてる という方がおられるようですが、その際にはどのような条件で凍結されているのでしょうか？ PBS?RPMI?それともセルライン用の溶液でしょうか？　-80度？ またどの程度の期間生きていますでしょうか？

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