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浮遊細胞から刺激後、すばやくRNA抽出する方法 トピック削除
No.1569-TOPIC - 2009/11/15 (日) 10:44:39 - RNA抽出
お世話になります。

みなさまのご意見をお聞かせください。

これまで、私は接着細胞からRNAを抽出する場合、培地をaspirationして、すぐにTRIZOLを投入していました。

この時、培地を抜いた際、面倒くさいのもあって、また変な刺激なども入るのも嫌なので、PBSなどでの洗浄もしておりません。


今後、浮遊細胞を扱うことになり、細胞を5分刺激後、すぐにRNA抽出したいと考えております。

状況はeppen tube (1.5 ml volume)で細胞を懸濁させ、5分刺激したあとにRNA抽出です。

普通に考えれば5分後、そのまま4度で遠心して上澄み液をaspirateしてTRIZOLを加えればいいのですが、サンプル数が非常に多く、簡単にできないかなあと考えています。まあ、一度にやらずできる範囲で遠心するのが無難なのは承知ですが、、、


ただ浮遊細胞からRNAを抽出する場合、遠心は致し方ないことなのかな?と疑問を感じて質問しました。

みなさまのやり方を教えていただけますと幸いです。
 
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(無題) 削除/引用
No.1569-3 - 2009/11/15 (日) 14:48:14 - おお
血液からRNAというキットもあるし、それとかのマニュアルとか
取り寄せて読んでみたら?

どうしても遠心したりあらったりがいやだったり、実験に影響が
あると思った時は、バイチごと処理しちゃうけどなぁ、、、
それなりに方法はあるとおもいますよ。

2種類ほど心当りがあります。詳細は時間があればまたかきこみます。

(無題) 削除/引用
No.1569-2 - 2009/11/15 (日) 13:10:57 - ;;
PBSで洗うことすら気にするのであれば、

>まあ、一度にやらずできる範囲で遠心するのが無難なのは承知ですが、、、

そうするしかないでしょうよ。

>浮遊細胞からRNAを抽出する場合、遠心は致し方ないことなのかな?

培地ごと加えるかってことですか?

楽したいのはわかりますが、手抜きできること、できないこと
しょうがないこと、あると思います。

むしろ、質問者様が何か手抜きを思いついていて、それと同じようなことを言ってくれる人をまっているのでしょうか?

地道に行きましょうよ。

浮遊細胞から刺激後、すばやくRNA抽出する方法 削除/引用
No.1569-1 - 2009/11/15 (日) 10:44:39 - RNA抽出
お世話になります。

みなさまのご意見をお聞かせください。

これまで、私は接着細胞からRNAを抽出する場合、培地をaspirationして、すぐにTRIZOLを投入していました。

この時、培地を抜いた際、面倒くさいのもあって、また変な刺激なども入るのも嫌なので、PBSなどでの洗浄もしておりません。


今後、浮遊細胞を扱うことになり、細胞を5分刺激後、すぐにRNA抽出したいと考えております。

状況はeppen tube (1.5 ml volume)で細胞を懸濁させ、5分刺激したあとにRNA抽出です。

普通に考えれば5分後、そのまま4度で遠心して上澄み液をaspirateしてTRIZOLを加えればいいのですが、サンプル数が非常に多く、簡単にできないかなあと考えています。まあ、一度にやらずできる範囲で遠心するのが無難なのは承知ですが、、、


ただ浮遊細胞からRNAを抽出する場合、遠心は致し方ないことなのかな?と疑問を感じて質問しました。

みなさまのやり方を教えていただけますと幸いです。

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