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組織に取り込まれたGFPは見れる? トピック削除
No.1562-TOPIC - 2009/11/13 (金) 22:30:48 - 染色初心者
ある蛋白質の動物の鼻粘膜面からの取り込み過程を見たいと思っています.GFPを融合した蛋白質を作製し,鼻腔に投与して,一定時間後に鼻腔の切片を作って蛍光顕微鏡下で観察しようと思うのですが,GFPの蛍光は観察できるものなのでしょうか?抗体染色にしたほうがいいのでしょうか??今のところパラフィン切片を考えているのですが・・・.
細胞に発現させる話は色々目にするのですが,動物レベルでの取込みの話はほとんど目にしません(調べ方が悪いのかもしれませんが・・・).
しょうもない質問かもしれませんが,どなたか知っていたら教えて下さると助かります.
 
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(無題) 削除/引用
No.1562-2 - 2009/11/15 (日) 19:14:31 - AP
振りかけたGFP標識タンパク質の細胞への取り込みがトレースできるどうかはしりません。しかし、GFPがパラフィン切片作成過程に耐えて光るかどうかということなら無理っぽいです。GFPは有機溶媒には弱く、アルコールにさらされるだけでも退色します(たとえばアルコールを含む固定液、有機溶媒系のマウントはNG)。抗体染色なら可能性はありますが、それならGFP標識がベストチョイスではないかも。

組織に取り込まれたGFPは見れる? 削除/引用
No.1562-1 - 2009/11/13 (金) 22:30:48 - 染色初心者
ある蛋白質の動物の鼻粘膜面からの取り込み過程を見たいと思っています.GFPを融合した蛋白質を作製し,鼻腔に投与して,一定時間後に鼻腔の切片を作って蛍光顕微鏡下で観察しようと思うのですが,GFPの蛍光は観察できるものなのでしょうか?抗体染色にしたほうがいいのでしょうか??今のところパラフィン切片を考えているのですが・・・.
細胞に発現させる話は色々目にするのですが,動物レベルでの取込みの話はほとんど目にしません(調べ方が悪いのかもしれませんが・・・).
しょうもない質問かもしれませんが,どなたか知っていたら教えて下さると助かります.

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