Bio Technical フォーラム

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安定発現株選択 トピック削除
No.1524-TOPIC - 2009/11/10 (火) 04:26:47 - retro
GFP融合タンパク質を発現するレトロウイルスを感染させて安定発現株を取ろうとしています。
手持ちのウイルス発現プラスミドのLTRで挟まれている領域には薬剤マーカーがないためFACSで選別しようと思っています。

この場合、FACS以外にウイルスが感染した安定発現株を選択する方法はありますか？
CD4／CD8を共発現させてMACS選択という手もあるようですが、手持ちのプラスミドではそういうマーカーも入っていません。
　
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(無題) 削除/引用
No.1524-3 - 2009/11/11 (水) 08:03:46 - ~
１．プレート上か、軟寒天培地上または中でコロニーを作らせる
２．蛍光顕微鏡で見て発現しているコロニーをチェック
３．そのコロニーを回収

(無題) 削除/引用
No.1524-2 - 2009/11/10 (火) 04:39:45 - おお
限界希釈法

安定発現株選択 削除/引用
No.1524-1 - 2009/11/10 (火) 04:26:47 - retro
GFP融合タンパク質を発現するレトロウイルスを感染させて安定発現株を取ろうとしています。
手持ちのウイルス発現プラスミドのLTRで挟まれている領域には薬剤マーカーがないためFACSで選別しようと思っています。

この場合、FACS以外にウイルスが感染した安定発現株を選択する方法はありますか？
CD4／CD8を共発現させてMACS選択という手もあるようですが、手持ちのプラスミドではそういうマーカーも入っていません。
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