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(無題) 削除/引用 No.1474-2 - 2009/11/04 (水) 10:49:38 - おお >[Re:1] トリゾールさんは書きました : > > トリゾールからタンパクの回収は可能なようですが、なにかバイアスのかかったタンパク回収法となりますでしょうか？ 実際やったりしますが、バイアスがかかるといわれれば、否めないです。 ただ同じ条件で同じタンパクの比較ならたいていはアクセプタブルかと 思ってます。 > 実際にタンパク抽出を行っている方がおられましたら、その方法やコツなど教えてくださいませんでしょうか？よろしくおねがいします。 説明書に確かタンパクのとり方を書いてますね、、、 まそれをあまり読まずに、フェノール層と中間層に4倍程度のアセトン をくわえ-80で１時間からオーバーナイトご遠心してかいしゅうしてます。 ペレットは溶解しにくいのですが、ここでどなたかペレットが 底に押しつぶされて凝縮しない程度のよわい遠心をすると いうアドバイスを見たことがあります。 アセトンはたしかヒストンだっけ、、、とか回収しにくい タンパクがあるそうですが、メタノールクロロフォルム法 でも回収できるかもしれませんので、パイロットてきな 実験を貴重なサンプルを使う前にやってみるといいかもしれませんね。

トリゾールを利用したタンパク回収法について 削除/引用 No.1474-1 - 2009/11/03 (火) 16:50:32 - トリゾール みなさまにお聞きしたいことがあり、トピックを立てました。 もし不適切でありましたら、削除いたします。 これまでトリゾールを利用して培養細胞からRNAの回収を行ってRT-PCR等を行ってきました。 細胞が貴重なため、トリゾールでRNAを抽出しつつ、タンパクが回収できればSDS-PAGEをも行いたいと考えております。 トリゾールからタンパクの回収は可能なようですが、なにかバイアスのかかったタンパク回収法となりますでしょうか？ たとえば、○●性のタンパクは回収されにくいとかされやすいなどです。 実際にタンパク抽出を行っている方がおられましたら、その方法やコツなど教えてくださいませんでしょうか？よろしくおねがいします。

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