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ウイルスを用いた遺伝子導入の機構について トピック削除
No.1468-TOPIC - 2009/11/03 (火) 00:00:48 - p
レトロウイルスを用いて外来遺伝子を哺乳類細胞に導入し、stable cell lineが確立される際についての話です。
おそらくプロウイルスになるのと同じ機構で核内で外来遺伝子が挿入される、という話はよく目にするのですが、そもそも転写されたDNAがどのようにホストDNAに挿入されるかのメカニズムがよくわかりません。

いままではそういうものなんだとあやふやにしていましたが遺伝子工学に関わるようになり、無視できなくなりました。
自分は知識不足なのでよろしければどなたかご教授ください。

よろしくお願いいたします。
 
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No.1468-6 - 2009/11/03 (火) 20:47:24 - p
なるほど 皆さんのおかげで解決しました。
ありがとうございます。

(無題) 削除/引用
No.1468-5 - 2009/11/03 (火) 15:01:10 - USB
レンチウイルスのpreintegration complex(PIC)は核膜孔を通過できるが、レトロのPICは核膜孔を通過できないためです。

レトロウイルスがインテグレーションするために、宿主の染色体にアクセスするには核膜が消失する分裂期が必要です。ですので、レトロウイルスは増殖細胞にしかウイルスゲノムをインテグレートできません。

一方、レンチのPICは核膜孔を通れるので非増殖系細胞の染色体にもアクセス可能であり、このため非増殖系細胞でもウイルスゲノムをインテグレートできます。

(無題) 削除/引用
No.1468-4 - 2009/11/03 (火) 14:18:40 - おお
>[Re:3] ともさんは書きました :
> まず、逆転写後の2本鎖DNA末端をインテグラーゼが認識し、3’末端2bpを切ります。そして、切られた3’末端はOH基になり、そのOH基が求核反応により染色体を切り、ウイルスDNAと染色体をジョイントします。そこには5bpのgapができているのでそれを宿主のDNA修復タンパクで修復します。以上で組み込み完了です。

便乗で質問させてください。
HIVはそのたのレトロとちがって、非増殖細胞のゲノムに
もインテグレートされるということのようですが、この違いは
どこから来るのでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.1468-3 - 2009/11/03 (火) 14:13:50 - とも
まず、逆転写後の2本鎖DNA末端をインテグラーゼが認識し、3’末端2bpを切ります。そして、切られた3’末端はOH基になり、そのOH基が求核反応により染色体を切り、ウイルスDNAと染色体をジョイントします。そこには5bpのgapができているのでそれを宿主のDNA修復タンパクで修復します。以上で組み込み完了です。

(無題) 削除/引用
No.1468-2 - 2009/11/03 (火) 05:11:34 - おお
中途半端な知識であまり説明はできませんが
レトロウイルスはintegraseをコードしていて(polの領域)
それが使われるのだとおもいます。
レトロウイルスとintegraseで検索されれば簡単に
情報を得ることができると思います。

ウイルスを用いた遺伝子導入の機構について 削除/引用
No.1468-1 - 2009/11/03 (火) 00:00:48 - p
レトロウイルスを用いて外来遺伝子を哺乳類細胞に導入し、stable cell lineが確立される際についての話です。
おそらくプロウイルスになるのと同じ機構で核内で外来遺伝子が挿入される、という話はよく目にするのですが、そもそも転写されたDNAがどのようにホストDNAに挿入されるかのメカニズムがよくわかりません。

いままではそういうものなんだとあやふやにしていましたが遺伝子工学に関わるようになり、無視できなくなりました。
自分は知識不足なのでよろしければどなたかご教授ください。

よろしくお願いいたします。

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