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回答ありがとうございます。 削除/引用 No.1461-3 - 2009/11/02 (月) 14:16:44 - りく ats様 ご回答ありがとうございます。 プレキャストゲルを使用しておりましたので、電気泳動の手間とコストを考えて、余っているメンブレンで何とかできないかと横着を考えておりました。 確かに、手間を惜しんでいてはいい結果は得られませんね ご教示ありがとうございました。早速試してみようと思います。

dot blotは不適切 削除/引用 No.1461-2 - 2009/11/02 (月) 12:10:33 - ats 抗体濃度の検討は、それを用いる方法でおこなうのがベストです。 したがって、今回もサンプルをwestern blotし、評価してください。 prestained marker等を指標に短冊状に切断し、パラフォルムの箱船に入れて抗体液と反応させると、一枚のblotで、数種類の濃度を検討できます. 非特異的なバンドの有無もわかるので、western blot法をおすすめします。 なお、SDS等のdetergentが高濃度含まれているとタンパクがメンブレンに結合しません(しにくい）ので、dot blotには向かないと思います。どうしても使用するならDDW等で希釈してください。

ドットブロットのサンプル 削除/引用 No.1461-1 - 2009/11/02 (月) 11:36:34 - りく いつも参考にさせていただいています。 ウエスタンブロッティングでの抗体濃度を決めたいのですが、ドットブロット法を用いたいと思っています。 この場合、サンプルは還元剤にて処理、熱変性を行うべきでしょうか？ サンプルは10^6コの培養細胞をLoading dyeに溶解しております。必要であれば通常のバッファーに溶解したいと思います。 初歩的な質問で申し訳ありませんが、ご教示下さい。

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