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(無題) 削除/引用 No.1452-6 - 2009/10/31 (土) 11:45:40 - ats 30~50mer長のオリゴをよく注文しますが、あるメーカー（OPC精製）品でPCR後subcloning＞シークエンスするとprimer部分に変異が入っていることが頻繁にありました。はじめは鎖長に対して精製法のグレードが低いためかと思いました。その後も同じ現象が続き、注文数あたり1/20ほどの頻度で内部増幅部位より変異の確率が高かったので、メーカーに問い合わせました。しかし納得のできる回答ではなかったので、メーカーを北海道システムサイエンス社（OPC精製）にかえたことがあります。現在は価格の関係でシグマジェネシス社（ゲル濾過精製）に変えていますが、両者とも問題はないです。

(無題) 削除/引用 No.1452-5 - 2009/10/31 (土) 10:12:56 - 中年 「ばかり」というのがどのくらいかわかりませんが、60merだと10クローンくらいチェックする必要があるのはよくあることだと思います。同じ受託会社でもロットによるようですが。

(無題) 削除/引用 No.1452-4 - 2009/10/31 (土) 07:37:08 - おお TAKARAが大昔に宣伝してましたね。そのままトランスフェクションして、 マンマルで発言させたり出来るよって、、、99%以上の精度だって いってましたので、99個に一個がはずれなのか、シーケンスが99% 正しいのかってきいたら、黙り込んでいました、、、、、、

(無題) 削除/引用 No.1452-3 - 2009/10/31 (土) 00:58:29 - TS 原因の一つは、注文してるグレードじゃないんでしょうか？　Pageグレードであれば、大概のメーカーはきちんと作ってくれると思います。 おすすめというほどではないですが、私は日本遺伝子研究所を使って、そのくらいのOligoは問題ありませんでした。 また、アメリカで使っていたIDT社も、HPを見る限り、日本からでも安価でPageグレードを提供しているように思います。 ちなみに、ダメだったメーカーはどこなんでしょうか？　今後の参考にもしたいので、教えて頂けないでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.1452-2 - 2009/10/31 (土) 00:47:38 - 取れたらいいね！ 塩基の「抜け」が多いのなら、合成後にPAGE精製をお願いしたら？ 最も長く伸びたバンドを回収するので、「抜け」の対策には効果的です（高いけど）。 ただ今時、60base程度で変異が多いのであれば、メーカーを変える方が良いと思います。 「お勧め」といっても難しいですが、値段が高くても、試薬販売なども行っているような、大手メーカーに任せるのが無難だと思います。

長鎖DNAオリゴ合成 削除/引用 No.1452-1 - 2009/10/31 (土) 00:24:13 - mutant いつも参考にさせてもらってます。 60mer程度のオリゴDNAを合成したいと考えています。いつもPCR primerを注文している会社に作成してもらったところ、mutationが入ったものばかり取れてきて困っています。長鎖DNAオリゴ合成にお勧めの会社があれば教えて下さい。

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