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GEのHiTrapカラムを用いたタンパク精製 トピック削除
No.1436-TOPIC - 2009/10/29 (木) 08:17:24 - D
今回AKTApurifierとHitrap DEAE FF 1mlカラムを用いて目的タンパクの精製を行う予定です。AKTApurifier は購入後初使用になるので、AKTApurifier を使用前に、マニュアルでHitrap DEAE FF 1mlカラムを用いて精製してみようと思っています。
 マニュアルで一定流量を流すのは難しいと思うのですが、これまでにマニュアルで精製を行なったことがあるかたはいらっしゃいますでしょうか?とくに注意するべき点があれば教えてください。
 
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No.1436-7 - 2009/10/29 (木) 22:25:29 - あかね
空気が入いらないように注意して下さいね。

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No.1436-6 - 2009/10/29 (木) 22:23:59 - Xan
>マニュアルというのはシリンジを手で押して(特殊なポンプなどを使わず)精製するという意味ではないのでしょうか?

間違っていませんよ。ただ、AKTAをマニュアルで使う(プログラムを組まずに使う)のも普通のことなので、下のような答え方をされてるんだと思います。

で、シリンジでの精製ですが、問題なくやれますよ。
流量もシリンジのメモリでやっても良いし、eluentの滴下数でみてもいいし。
一度系が組み上がってしまえば、AKTA使うよりも手軽だし簡単にルーチンの精製ができます。

(無題) 削除/引用
No.1436-5 - 2009/10/29 (木) 17:05:11 - D
精製初心者なので勘違いしているかもしれませんが、マニュアルというのはシリンジを手で押して(特殊なポンプなどを使わず)精製するという意味ではないのでしょうか?

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No.1436-4 - 2009/10/29 (木) 08:51:04 - おお
あ、そうだ。サンプルポンプを使っているときは
フラコレが動かないんだけど、それは私のところだけなんだろうか、、、、

なのでサンプルポンプを動かしている時はフラコレ使わず、
フロースルーを回収してます。

本体のポンプも回した状態なら動くかもしれません。

(無題) 削除/引用
No.1436-3 - 2009/10/29 (木) 08:45:44 - ;
液をカラムに流すとき、別にそこまでml/minを守らなければいけないとかはないです。
指定されている流速よりも速いとちょっとダメかもしれませんが。

それより遅い分にはあまり気にしたことはありません。

ほかの注意点はマニュアルでない場合と特に変わりません。

(無題) 削除/引用
No.1436-2 - 2009/10/29 (木) 08:32:17 - おお
>マニュアルで一定流量を流す

この事が何を意図して言っているのか分かりませんが、、、、
マニュアルだと一度止めてとかいう作業はするかもしれませんが、
流している限り流速は厳密にコントロールされているような
感じはありますし、トータルの量も決めれますし、、、

もし、止めたりしながら進めるのが嫌であれば、ポンプを止めずに
張り付いて弁の切り替えを行っていけば可能ですし、、、、

マニュアルはよくやっていますよ。

注意する点は、通常のクロマトで必要な注意点がおもとおもいますが、、
たとえば泡をかませないようにするとか、、、

あとUNUCONEだったけ、バルブそのた設定してスタートして
一端止めると、初期設定に戻ってるパラメーターも結構あった
かもしれないので、再開する時は毎回すべてのパラメーターを
設定するか確認した方がいいかもしれません。

ポーズでとめると必要な所だけ変更するだけで、デフォルト
に戻ることはないのでそっちのほうがいいと思います。

GEのHiTrapカラムを用いたタンパク精製 削除/引用
No.1436-1 - 2009/10/29 (木) 08:17:24 - D
今回AKTApurifierとHitrap DEAE FF 1mlカラムを用いて目的タンパクの精製を行う予定です。AKTApurifier は購入後初使用になるので、AKTApurifier を使用前に、マニュアルでHitrap DEAE FF 1mlカラムを用いて精製してみようと思っています。
 マニュアルで一定流量を流すのは難しいと思うのですが、これまでにマニュアルで精製を行なったことがあるかたはいらっしゃいますでしょうか?とくに注意するべき点があれば教えてください。

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