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解決したけど・・・ 削除/引用 No.1372-9 - 2009/10/20 (火) 23:14:05 - まさ すみません、パスワードを忘れてしまって解決のチェックが選択できません 泣 この質問は解決です。

なるほど！ 削除/引用 No.1372-8 - 2009/10/20 (火) 23:09:35 - まさ ＞アグロさん おぉ！なるほど！ 納得しました。 これは気付きませんでした！ ＞弘法さん 遺伝子破壊の表現型がはっきりしてないのと、PCRをするにはprimer設計からしないといけないのでG418選択で見ようと思います。 幸運にも他の研究室から少しG418を譲っていただけることになりましたので、そちらを使おうと思います。 これでこの質問は解決としようと思います。 答えてくださった皆さん、ありがとうございました。 また、質問した際にはよろしくお願いします。

(無題) 削除/引用 No.1372-7 - 2009/10/20 (火) 19:54:47 - 弘法 私の説明が不十分で誤解をされているようですが、そういう状況ならもはやG418選択は不要だと思います。遺伝子破壊の表現型がはっきりしているならそれを確認すれば十分だと思いますし、どうしても気になるようでしたらPCRなどで確認した方が確実です。

(無題) 削除/引用 No.1372-6 - 2009/10/20 (火) 18:57:00 - アグロ 簡単に言えば、カナマイシンは原核細胞のリボソームに作用し、ジェネティシンは真核細胞のリボソームに作用します。同じリボソームでも原核と真核ではかなり構造が違うので、そこで薬物感受性の違いが出てきます。 なら植物も真核じゃないかとお思いでしょうが、植物にはもう一つ、葉緑体のリボソームがあります。こちらは原核細胞のリボソーム類似なのでカナマイシンが効き、葉緑体の機能が阻害されて結果として植物細胞の生育を妨げるわけです。

回答ありがとうございます。 削除/引用 No.1372-5 - 2009/10/20 (火) 17:31:04 - まさ ＞弘法さん 説明が足らなくてすみません。 私が行いたいのは後者でおっしゃられているように、すでにKanMXがゲノム上に導入されているものをプレートにおこそうという作業です。 私もジェネティシンを少し貰おうかと思ったのですが、カタログで調べるとなかなか高価なものでしたので貰いづらいなと思っていました。ですがカナマイシンでは代用がきかないようなので１回分だけ貰ってみようかと思います。 教えていただきありがとうございました。 -------------------- しかし、なぜカナマイシンは植物細胞の選抜には使えて酵母には使用できないのでしょうか・・・。 論文等を少し調べてみます。

(無題) 削除/引用 No.1372-4 - 2009/10/20 (火) 14:42:45 - 弘法 後で気がついたのですが、おやりになりたいのはKanMX断片を含むDNAで酵母を形質転換する、つまりG418感受性の株の海からG418耐性の僅かな株を選別することなんですか。それとも、既にKanMXがゲノムに挿入された株をストックから起こしてきたいということでしょうか。 前者であればG418プレートでの選択が必要でしょうが、後者であればG418を含まない培地で起こしてきて、生えてきたコロニーについてKanMXがゲノムに挿入されていることをPCRなどを使って確認すれば十分です。ゲノムに挿入されたDNAは十分に安定なので、プラスミドを選択するのとは状況が違います。 G418は近所の培養細胞やってる部屋にきっとありますので、どうしても必要なら一回分だけ分けて貰ってはいかがでしょう。

(無題) 削除/引用 No.1372-3 - 2009/10/20 (火) 07:34:44 - おお >[Re:1] まささんは書きました : > カナマイシンで代用はきかないものでしょうか。 No way!

(無題) 削除/引用 No.1372-2 - 2009/10/19 (月) 16:54:48 - 弘法 真核生物である酵母にカナマイシンは効きません。ジェネティシン（＝G418）を使ってください。

酵母へのカナマイシンの効果について 削除/引用 No.1372-1 - 2009/10/19 (月) 13:09:48 - まさ 現在、選択マーカーとしてKanMXが導入されている出芽酵母をセレクションしたいと考えています。 通常酵母にはジェネティシンという抗生物質を使うそうなのですが、当研究室にはカナマイシンしかありませんでした。 カナマイシンで代用はきかないものでしょうか。 また、濃度はいくらぐらいを用いるものなのでしょうか。 酵母に関しては無知なので、初歩的な質問になるかもしれませんがお願いします。

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