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(無題) 削除/引用 No.1371-5 - 2009/10/19 (月) 14:29:43 - ~ どのようなステップで培養と篩を行っているのか分からないのですが、 細胞が死ぬのは篩にかけた後でいいのでしょうか？ マーカー2種類で篩にかけたというのは、蛍光抗体などを使ってセルソーターにかけたということですよね。 細胞のダメージは予備実験などで許容範囲内であることを確認済みでしょうか？ 自分で作業になれるか、なれている人に頼まないと、 セルソーター後に細胞を生かしておく事自体が難しいと思います。 ソート後に死細胞が多いのであれば、ソーターの条件が悪くて死細胞も拾ってきているか、ソーターでダメージを受けて死んだのだと思います。 PIなどで死細胞の除去を行うためのチャンネルは残っていませんか？ 死細胞の除去がソーターで出来れば、ソートした時点では生きていた細胞のはずです。

(無題) 削除/引用 No.1371-3 - 2009/10/19 (月) 09:59:39 - 。 身近に培養している人はいないのですか？ ネットで助言してわかるのにも、ある程度の培養経験がないと無理かと思います。

(無題) 削除/引用 No.1371-2 - 2009/10/19 (月) 09:07:54 - おお 詳しいことはわかりませんが、血清のロットは?

細胞がうまく育ちません。。。 削除/引用 No.1371-1 - 2009/10/19 (月) 08:46:00 - mo-circ 初めて質問させていただきます。 まだ、研究自体を始めて半年、細胞培養を始めて数ヶ月の ど初初心者なのですが、現在、内皮前駆細胞をあつかって 培養を行っていますが、どうにもうまく育ちません。 何かアドバイスがあればと思い質問させていただきました。 モデルは　12週前後のマウスからとった骨髄細胞を linageとCD117でふるいにかけた前駆細胞です。 mediumは市販のEBM-2、その中に血清(10%FCS)、抗生剤、ヘパリンVEGF,FGF,IGF.EGFを入れて培養しています。 多少生えてくるので、ふるいにかけた細胞自体は前駆細胞で間違い なさそうなのですが、死細胞が多く回収して次のPCRなどへの過程に 進めません。 これまでにmediumをかえたり、入れる増殖因子をかえたり、当初よりは 少しよくなってきているのですが、十分には生えません。 まだ初心者なので、手技的な問題なのかと思い、medium交換の頻度や 温度操作やピペッティング操作など非常に気を使ってやってはいるのですが。 あいまいな質問で大変申し訳ありませんが何かご助言がありましたら よろしくお願いいたします。

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