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(無題) 削除/引用 No.1362-8 - 2009/10/17 (土) 04:22:02 - Kazu 落とし穴はたくさんあるので、外人の先輩がちゃんと成功しているのであれば、先輩に身振り手振りで教えてもらうのが近道でしょう。

(無題) 削除/引用 No.1362-7 - 2009/10/17 (土) 03:52:28 - c お話を伺う限りでは、実験自体に問題があるというより、撮影装置の設定が適切でない可能性が大のような気がします。うまくいってるという先輩は一番適切な設定を知っていて、使用時に自分でその条件にして使っているのでは。いちどどのような条件で撮影しているのか見せてもらってそれと同じ設定でやってみれば。あるいはメーカーに連絡して見てもらうが確実かもしれません。 あと、たしか膜を包むラップの種類によっては使えないというのもあったような。（無蛍光のラップでないとダメとか指示がある機器もあったような記憶があるのですが？）

(無題) 削除/引用 No.1362-6 - 2009/10/16 (金) 22:18:45 - umauma 撮影装置はどこのものを使っていますか？ もし発光だけでなくゲル撮影もできるようなものだとフィルターの切り替えを忘れるとそうなったことがあります。

(無題) 削除/引用 No.1362-5 - 2009/10/16 (金) 21:22:18 - - 二次抗体か発色試薬が失活してるんでは？ 先輩にアクチン等、インターナルコントロールでのウエスタンを教えてもらっては？ 失敗したメンブレン、CBB染色でバンドは出ますか？

(無題) 削除/引用 No.1362-3 - 2009/10/16 (金) 19:58:59 - ！ ありがとうございます。 実は、私の研究室ではウェスタン経験者が日本語の不自由な外国人の先輩が一名いるのみで、なかなか意思疎通もできず、助言を頂ける方がいなくて困っていたところでした。 考えられるのは抗体の濃度ですが、二次抗体はanti-rabbit 1:10000でやっています。もう少し薄い濃度で挑戦したいと思います。 撮影装置の感光の問題ですが、それは上記の先輩が上手くいっているので問題ないと思います。

(無題) 削除/引用 No.1362-2 - 2009/10/16 (金) 19:24:33 - in situ １．ブロッキングのし忘れ ２．抗体濃度が高すぎる ３．撮影装置の露光が高すぎ このあたりでしょうか。 というより、文面からまだウエスタンに成功したことがないように読み取れるのですが、でしたら、先輩なり、先生なりについてもらって一つ一つ操作を確認しながら行うべきです。

ウェスタンブロット 削除/引用 No.1362-1 - 2009/10/16 (金) 18:19:38 - ！ ウェスタンブロットで、最終的に発光を写真で撮っているのですが、なぜかメンブレン全体が真っ白に写ってしまい、バンドがあるのかないのかさっぱりわかりません。 あるタンパクでメンブレン全体が真っ白になってしまい、別のタンパクと抗体で再チャレンジしかんですが、またメンブレン全体が白くなってしまいました。 別の抗体で別のタンパクを検出しているにも関わらず同じ失敗が起きるということは、恥ずかしながら私の手技が悪い可能性が大きいと思うのですが、この様な実験の失敗の背景にはどんなトラブルがあるのか御助言頂ければ幸いです。 ちなみに、二次抗体を反応させた後はしっかり洗っています。

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