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(無題) 削除/引用 No.1345-8 - 2009/10/16 (金) 20:27:30 - + あ、ちなみに酵素がNEBでも切れます。

(無題) 削除/引用 No.1345-7 - 2009/10/16 (金) 20:26:26 - + パンタさんのように詳しく実験はしていませんが、バッファーはFermentasのもので、TOYOBOの酵素を混ぜてもスター活性も起こらず5分で切れました。バッファーだけ欲しかったので問い合わせましたが、それのみは売ってないということなので、私はバッファーに何か秘密があるのではと考えています。詳細は不明ですが・・・

(無題) 削除/引用 No.1345-6 - 2009/10/16 (金) 12:04:32 - in situ パンタさま コメント大変ありがとうございます。 比較検討結果大変参考になりました。 やはり、酵素の方に秘密があるのですね。 現在まだ研究室に制限酵素があまりそろっていない状態なので、とりあえずいくつかFastDigestシリーズを買ってみようと思います。 試した結果をまた報告します。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.1345-5 - 2009/10/16 (金) 11:31:05 - パンタ あ、下のやつの結論、「秘密は酵素にあり」と私は考えています。

(無題) 削除/引用 No.1345-4 - 2009/10/16 (金) 11:28:28 - パンタ 同じことが気になって、サンプルをもらい実験してみました。 SacIでpUC19を切断しました。反応はサーマルサイクラーで行いました。 Fermentasの酵素、バッファーを使うと、ちゃんと５分で切れました。約500ng切断しましたが、ほぼ完全切断でした（環状は電気泳動で見えないレベル）。 TakaraのSacI（20units、多め）＋Fermentasのバッファーでは、５分では5~7割程度しか切れませんでした。 TakaraのSacI（20units）＋Takaraのバッファーでも５分では5~7割程度しか切れませんでした。 Fermentasの酵素＋Takaraのバッファーでも切ってみたところ、ほぼ完全切断されました。 自前のSacIサイトのないプラスミドを用いて、１時間反応させてみましたが、star活性、endonuclease活性は見られませんでした。 他の酵素では試していませんが、謳い文句通りの酵素であると考えています。 現在もサンプルをもらえるのであれば、ぜひ１度ご検討ください、、、って、なんか営業みたいになってしまいましたね

(無題) 削除/引用 No.1345-3 - 2009/10/16 (金) 11:08:54 - in situ +さま コメントありがとうございます。 FermentasのFastDigestシリーズは酵素の方を反応速度が速いやつをスクリーニングしてきたのだと思っていたのですが、バッファーの方がみそなのでしょうか？ 従来の制限酵素（NEBとかTAKARAとか）でも、FastDigestのバッファーを使えば早く切れるのですか？

(無題) 削除/引用 No.1345-2 - 2009/10/15 (木) 21:40:59 - + こんばんは。 Fermentas、酵素というか、バッファーを重宝していました。一度限界にチャレンジしてみましたが、切れる量を気にしなければ1分でも切れます（笑）

FermentasのFastDigest制限酵素 削除/引用 No.1345-1 - 2009/10/14 (水) 16:41:50 - in situ いつもお世話になります。 DNAの切断に使う制限酵素ですが、今までNEB、TAKARA、TOYOBOの中で安いものを使ってきたのですが、最近FermentasのFastDigestというものが気になっています。 バッファーが共通ですし、5分で切れるという謳い文句が本当ならかなり魅力的です。 最近輸入代理店であるコスモバイオの価格が改訂されて、NEBなどの価格にかなり近づいてきているので、ごっそりと移行することも考えています。 ただ、5分で本当に切れるのか、star活性、endonuclease活性などは大丈夫なのか、などが気になります。 FermentasのFastDigestを使った経験がある、常用されている、という方いらっしゃいましたら、感想などいただけるとうれしいです。 よろしくお願いします。

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