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メダカ稚魚のホールマウントアクチン染色 トピック削除
No.1335-TOPIC - 2009/10/12 (月) 23:56:45 - むすくる
メダカ実験の初心者のものです。

孵化直後のメダカ稚魚のアクチン線維の配列を見るために、ホールマウントでアクチン染色をしたいと思っています。
これまで、マウスの凍結切片の免疫染色しかやってこなかったので、ホールマウントで染める時のプロトコールがわかりません。
どなたか発生学をやっている方などで、サカナの稚魚のホールマウント染色をおこなったことのある方、スタンダードなプロトコールを教えていただけないでしょうか?
アクチン抗体でもファロイジンでもかまいません。
宜しくお願い致します。
 
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(無題) 削除/引用
No.1335-3 - 2009/10/29 (木) 19:40:12 - CJ
界面活性剤処理とか、メタノール+過酸化水素処理とかで標本をすかすかにするのが良いと思います。

(無題) 削除/引用
No.1335-2 - 2009/10/29 (木) 18:07:36 - 魚屋さん
私は稚魚のホールマウント染色は経験ありませんが、
embryoのホールマウントなら経験があります。

基本的には切片の免疫染色と同じですが、
ブロッキング、抗体反応ともに反応時間を長めにするのと、
各工程の間の洗浄を念入りにするのが大事なようです。

抗体がよければきれいに染まりますよ。

メダカ稚魚のホールマウントアクチン染色 削除/引用
No.1335-1 - 2009/10/12 (月) 23:56:45 - むすくる
メダカ実験の初心者のものです。

孵化直後のメダカ稚魚のアクチン線維の配列を見るために、ホールマウントでアクチン染色をしたいと思っています。
これまで、マウスの凍結切片の免疫染色しかやってこなかったので、ホールマウントで染める時のプロトコールがわかりません。
どなたか発生学をやっている方などで、サカナの稚魚のホールマウント染色をおこなったことのある方、スタンダードなプロトコールを教えていただけないでしょうか?
アクチン抗体でもファロイジンでもかまいません。
宜しくお願い致します。

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