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(無題) 削除/引用 No.1282-4 - 2009/10/03 (土) 15:23:29 - み おそらく制限酵素サイトを5'に付けておいてvectorに入れる場合に付加する足場のことでしょう。 付ける必要なし。っというより付けるな。 いちおう言っておくと、5'にTTTTTがあったとしてもそれに続くgene-specificな配列が必要十分な長さ・特異性があるなら問題なくPCRかかる。

(無題) 削除/引用 No.1282-3 - 2009/10/02 (金) 21:29:22 - yama RTの部分の特異的なプライマーでしょうか？ それともRTはオリゴdTなどでやって PCRの部分のプライマーでしょうか？ どちらにしろ足場をつけるという方法は初めて聞きました。

(無題) 削除/引用 No.1282-2 - 2009/10/02 (金) 18:46:30 - Pumpkin >primerの先頭に足場としてTTTTT これってどういう意図と意味なんですか？oligo dTプライマーのことでしょうか？全てのプライマーに対してそんなことをしていたら、PCRはかからないと思いますが。 oligo dTで合成したcDNAを鋳型に使うとして、Gene specificなプライマーセットを用意すればいいと思います。 RT-PCRは特異性が命なので、余分な配列は一切付けるべきではありませんよ。

RT-PCR のprimerについて 削除/引用 No.1282-1 - 2009/10/02 (金) 18:23:49 - R.U. 今回初めてRT-PCRを行うにあたって、 primer 3 plusでprimerを設計し、注文をすることにしました。 以前クローニングを行っていた時は primerの先頭に足場としてTTTTTをくっつけていましたが、 普通のRT-PCRで目的の遺伝子のmRNAの発現だけを見たい場合、 この足場は不要でしょうか？ 足場を付加した場合の影響はどのようなものでしょうか？ ご回答、よろしくお願いします。

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