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RNAse除去スプレー トピック削除
No.1272-TOPIC - 2009/10/01 (木) 06:41:23 - RNAse
いつもお世話になっています。

私のラボではRNA用のピペットマンや実験台を拭く際にRNA awayを使っています。しかし思いのほか使用量が多いため、3%H2O2に切り替えようと思っています、なぜならば濃度は忘れましたが、以前H2O2でRNA用のゲル板やコームを処理していたからです。

しかしH2O2がDNAにダメージを与えPCRの鋳型にもなりにくくさせることは知っていますが、RNaseへの効果のほどは知らないので、少々怖いと思っています。H2O2のRNase除去への効果を知っている方いましたら、ご教示ください。また、市販のRNAse除去スプレーには何が入っているのでしょうか？RNAlaterのように自作している方はいらっしゃいますか？
　
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ありがとうございました 解決済み 削除/引用
No.1272-7 - 2009/10/06 (火) 02:48:26 - RNAse
おお様

ありがとうございます。H2O2を使うことにいたします。
ema様
JBC文献提示いただきありがとうございます。読ませていただきます。AmbionのRNaseZapの泡は何だろうと思っていたのですが、SDSから生じていたと教えていただきありがとうございました。
p様、Pumpkin様
ご指摘いただきありがとうございます。RNA専用の実験場所を決めて、チューブはRNase Freeを使っています。スプレイは実験室内で共用しています。誰がどのくらい使っているかはよく分からないのですが、スプレイ以外で使っている方はいないようです。

皆様ありがとうございました。感謝しております。

RNaseZap派 削除/引用
No.1272-5 - 2009/10/02 (金) 11:20:02 - Pumpkin
p様が言われるように「おまじない」程度と思って、その他の操作やRNase失活のための乾熱やFreeディスポを使うなどのコンタミ抑制策をしっかりすることが先決でしょうね。その上で、効果があるものと信じています。圧倒的多数のRNaseを除去できるほど万能ではないでしょうから。

ただ、私はRNaseZapのペーパータイプでコームや電気泳動槽を拭いて、DEPC処理水で洗い流してから電気泳動しています。ゲルとMOPSバッファ、TAEバッファはDEPC処理水で作製してオートクレーブして用いています。分解が見られたことはありません。このペーパータイプなら、使用量は少なくて済みますよ（というかRNase Awayの使用量が多いって、浸漬かなんかしているんでしょうか？）。

そもそもキムタオルとかペーパーにはRNaseがついているって考える方が自然なので、RNase FreeになっているRNase Zapペーパーで拭く方がよりコンタミを防げると思います（もちろん、おまじない程度にしか考えていませんが）。

(無題) 削除/引用
No.1272-4 - 2009/10/02 (金) 08:29:36 - p
もともと市販のRNAse除去スプレーなどは

おまじない

程度のものとして考えるのがいいのではと、個人的に思います。
それらで劇的に変化するとは思いません。

なんとなーく 削除/引用
No.1272-3 - 2009/10/01 (木) 16:34:41 - ema
あれらの試薬はRNAse Inhibitorなのでは？除去、、、というよか。

これは近いんでは？
Hydrogen peroxide-induced structural alterations of RNAse A.
The Journal of biological chemistry 276(12):9492-502, 2001 Mar 23 -

RNaseZap from Ambion (or 0.5% SDS followed by 3%H2O2)

10 Ways to Work RNase Free
by Nick on November 1, 2007
http://bitesizebio.com/2007/11/01/10-ways-to-work-rnase-free/
っているのもありました。

ノーザンではだいたいH２O2で、アレイ範囲はRNAawayにしてます。

(無題) 削除/引用
No.1272-2 - 2009/10/01 (木) 06:58:59 - おお
H2O2をあまり根拠なく信じてつかっています。
全く根拠がないかというと、そうでもなくRNA実験プロトコール
集(洋書ですが、買おうと思ったらもう売ってなかった)で
H2O2でRNase除去するというのを見かけたことがあります。

市販のやつは何が入っているか私も気になりますね。

RNAse除去スプレー 削除/引用
No.1272-1 - 2009/10/01 (木) 06:41:23 - RNAse
いつもお世話になっています。

私のラボではRNA用のピペットマンや実験台を拭く際にRNA awayを使っています。しかし思いのほか使用量が多いため、3%H2O2に切り替えようと思っています、なぜならば濃度は忘れましたが、以前H2O2でRNA用のゲル板やコームを処理していたからです。

しかしH2O2がDNAにダメージを与えPCRの鋳型にもなりにくくさせることは知っていますが、RNaseへの効果のほどは知らないので、少々怖いと思っています。H2O2のRNase除去への効果を知っている方いましたら、ご教示ください。また、市販のRNAse除去スプレーには何が入っているのでしょうか？RNAlaterのように自作している方はいらっしゃいますか？
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