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抗FLAG抗体を用いたIPの際のSDSの濃度 トピック削除
No.1264-TOPIC - 2009/09/30 (水) 11:10:47 - FLAG
いつも勉強させてもらっています。
今回、経験者の意見を伺いたく、トピックを立てました。

現在、抗FLAG抗体を用いたクロマチン免疫沈降を計画しています。クロマチンのソニケーションはUpstateのキットにしたがって行い、1%SDS溶解バッファーを用いました。
いざIPしようとして抗FLAG抗体の説明書を見ると、抗FLAG抗体でのIPの際にはSDSを含んではいけないことが書かれていました。IPは希釈バッファーでサンプルを10倍希釈してから行うのですが、それでも0.1%のSDSは含まれてしまいます。

そこでお聞きしたいのですが、
1)どなたか抗FLAG抗体をもちいてSDS入りバッファーでIPされた方おられますでしょうか?経験をお聞かせください。
2)実験の都合上、希釈バッファーで10倍希釈できない可能性を考えています。そこで、何%のSDSまでなら使用可能でしょうか?経験をお聞かせください。

やってみないとわからないことですが、とりあえず実行前に経験者の意見をいただければ幸いです。
ちなみに、Sigmaに聞いたところ、SDSの許容濃度は調べてないということでした。
 
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ありがとうございました。 削除/引用
No.1264-3 - 2009/10/01 (木) 08:23:05 - FLAG
み様
使用予定はM2です。M2は0.1%までなら可能なのですね。

どなたかそれ以上のSDSで行った方おられませんでしょうか?
また、M2のみならず、他の種類(ポリクロ)等の経験談があればお聞かせください。

(無題) 削除/引用
No.1264-2 - 2009/09/30 (水) 12:08:02 - み
重要な情報が抜けてますね:どの抗体ですかね?ポリクロ?モノクロ?クローンは何ですか?
最近、質問の仕方が皆さん雑ですね。それでも研究者かと疑問に思う。

M2なら0.1%は可能です(ChIPではなく普通のIPですが)。

抗FLAG抗体を用いたIPの際のSDSの濃度 削除/引用
No.1264-1 - 2009/09/30 (水) 11:10:47 - FLAG
いつも勉強させてもらっています。
今回、経験者の意見を伺いたく、トピックを立てました。

現在、抗FLAG抗体を用いたクロマチン免疫沈降を計画しています。クロマチンのソニケーションはUpstateのキットにしたがって行い、1%SDS溶解バッファーを用いました。
いざIPしようとして抗FLAG抗体の説明書を見ると、抗FLAG抗体でのIPの際にはSDSを含んではいけないことが書かれていました。IPは希釈バッファーでサンプルを10倍希釈してから行うのですが、それでも0.1%のSDSは含まれてしまいます。

そこでお聞きしたいのですが、
1)どなたか抗FLAG抗体をもちいてSDS入りバッファーでIPされた方おられますでしょうか?経験をお聞かせください。
2)実験の都合上、希釈バッファーで10倍希釈できない可能性を考えています。そこで、何%のSDSまでなら使用可能でしょうか?経験をお聞かせください。

やってみないとわからないことですが、とりあえず実行前に経験者の意見をいただければ幸いです。
ちなみに、Sigmaに聞いたところ、SDSの許容濃度は調べてないということでした。

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