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ELISA用の組織ホモジネートの回収方法
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No.125-TOPIC - 2009/03/03 (火) 09:19:09 -
たく
ある組織から手術で検体をとってきて、それをホモジネートして上清からELISAでサイトカインの測定をしようと思っています。
組織をホモジネートする際に溶媒は生食でよいでしょうか。
参考にした論文ではLIPA液というものにプロテアーゼを加えて行ってましたが、ここまで必要でしょうか。
また-80度で保存しておればしばらくサイトカインは分解されないものなのでしょうか?
教えてください。
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No.125-5 - 2009/03/05 (木) 09:01:26 -
たく
回収した組織をどのくらいの重量/mlでホモジネートすればよいかも教えていただければ幸いです。
ELISAでは
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No.125-4 - 2009/03/05 (木) 00:53:31 -
RO1
実験のデザインにもよりますが、各サンプル3 wellづつ必要なので300micro litterは最低必要じゃないですか。
(無題)
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No.125-3 - 2009/03/04 (水) 07:22:29 -
たく
ありがとうございます。さっそく購入して試してみます。
もうひとつ質問なのですが、どれくらいの組織量をどのくらいの溶媒に溶かすかを決定する際、どのように決定しているのでしょうか?
なにか目安などあれば教えてください
PBSTで
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No.125-2 - 2009/03/03 (火) 16:15:42 -
RO1
粘膜組織をホモジネート後、ELISAしてます。
採取した組織をSigmaのproteinase inhibitor入りの0.05% TWEEN20を含むPBSでホモジネートして上清を使ってます。
ターゲットはIL-6, 1betaなど一般的な炎症性サイトカインです。
これでうまくいってます。
逆にdetergentのたくさん入ったlysis bufferだとサンプルが分解されるのか、抗体の結合が阻害されるのかうまく検出できませんでした。
ELISA用の組織ホモジネートの回収方法
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No.125-1 - 2009/03/03 (火) 09:19:09 -
たく
ある組織から手術で検体をとってきて、それをホモジネートして上清からELISAでサイトカインの測定をしようと思っています。
組織をホモジネートする際に溶媒は生食でよいでしょうか。
参考にした論文ではLIPA液というものにプロテアーゼを加えて行ってましたが、ここまで必要でしょうか。
また-80度で保存しておればしばらくサイトカインは分解されないものなのでしょうか?
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