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ありがとうございます！ 削除/引用 No.1238-3 - 2009/09/24 (木) 14:55:55 - ちびた 早速のご回答ありがとうございます。 BACがそんなにすぐちびるものだとは知りませんでした。 逆に、Cm 10micro g/mLおよびKn 50micro g/mLでも 増えまくるのは怪しいのでしょうか。 Cmはこれ以上濃度を下げなくて大丈夫ですか？

(無題) 削除/引用 No.1238-2 - 2009/09/24 (木) 14:40:58 - ats BACは培養中にdeletionしやすいので、元のBACクローンは問題ないでしょうか。 問題がある場合、もう一度クローニングして正常サイズのBACを持ってるクローンを拾ってください。20-25度で培養するとdeletionしにくい時もあります。 また、Kn濃度は20-25ug/mL(親株が生えてこないぎりぎりの濃度）まで下げてもよいかも。

Cre/LoxP 削除/引用 No.1238-1 - 2009/09/24 (木) 13:54:18 - ちびた BACベクターのHomologousなLoxPサイトに相同組換えで インサートを入れようとしているのですが、 Kn、Cm二重耐性で取れてくるクローンのDNAサイズが 何故か期待したものより小さくなってしまってしまいます。 このような経験をされた方はいらっしゃいますか？ セレクション濃度はCm 10micro g/mLおよびKn 50micro g/mLで、 ベクターは100kb、インサートは10kbほどです。 セレクションしている間にDNAがちびてしまったのでしょうか・・・。

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