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(無題) 削除/引用 No.1227-9 - 2009/09/23 (水) 13:00:17 - かんとりぃまぁむ >>おおさん ありがとうございます。 次回購入時に参考にさせていただきます。

(無題) 削除/引用 No.1227-8 - 2009/09/23 (水) 02:56:40 - ねうろん >>おおさん ありがとうございます。 問題が生じる以前に、Cos7、293細胞を使ってMycタグを9E10で染めた経験は有ります。その時は問題なかったので、どうしてこうなったか気になっていたのです。 調べてみると、9B11、A14ともにHumanのアミノ酸配列を使っているようなのですが、、、 うーん、何故だろう。。。 N2aー9E10の組み合わせならうまくいくのか、それとも 他のマウス細胞ー9B11、A14ならうまくいくのか、、、 他の皆様も何か御存知ないでしょうか？ （すいません、トピ主さん話題をずらしてしまって）

(無題) 削除/引用 No.1227-7 - 2009/09/23 (水) 01:08:54 - おお >[Re:3] おおさんは書きました : > マウスならMYCはエンドとクロスリアクトします。 失礼いたしました、私の勘違いです。 タグのエピトープは人由来で、マウスとは交差しません。 ですから、人の細胞など使う時要注意ということです。 > 当方、N2a (mouse neuroblastoma) にMyc-Xをトランスフェクションしanti-Myc抗体（9B11（CST）、A14（santa cruz））で染色、観察した事があるのですが、コントロールである空ベクターを導入した細胞においてもかなりはっきりとしたシグナルが観察されてしまいました。現在はFlagタグのついたものに変更し、その問題は放置してしまったのですが、、、 > 9e10をよく使ってます。この抗体は、上記に訂正しましたように 人の配列から得られたモノクローナルでマウスやCOSなどのエンド とクロスリアクトしないというふうに聞いています。 たの抗体についてはそれぞれ情報が必要かもしれませんが、、、、

(無題) 削除/引用 No.1227-6 - 2009/09/23 (水) 00:45:44 - ねうろん >[Re:3] おおさんは書きました : > マウスならMYCはエンドとクロスリアクトします。 Mycとマウスの関係についてもう少し詳しく状況を教えていただけないでしょうか？ 当方、N2a (mouse neuroblastoma) にMyc-Xをトランスフェクションしanti-Myc抗体（9B11（CST）、A14（santa cruz））で染色、観察した事があるのですが、コントロールである空ベクターを導入した細胞においてもかなりはっきりとしたシグナルが観察されてしまいました。現在はFlagタグのついたものに変更し、その問題は放置してしまったのですが、、、 原因and/orこれを回避する方法（抗体）をもし御存知でしたら御教授頂けると幸いです。

(無題) 削除/引用 No.1227-5 - 2009/09/23 (水) 00:18:58 - おお >[Re:4] かんとりぃまぁむさんは書きました : > 以前SCのHA抗体（ロットは忘れました）でIPしようとしたら全く駄目でFLAGに変えたらばっちりだったことがありました。 > > >IPはHAとかRIPA(0.1%SDSいり)でもしっかり落ちる印象があります。 > ほかもIPに使えますけどね、、、 > おおさんはどちらのHA抗体をお使いですか？まわりにIPをやっている人（分野的にも）が少ないのでご教授願えると幸いです。 > コバンスのモノクロクローン(HA)1.1だったと思います。 おなじクローンなら別会社でも信用できる会社 なら多分大丈夫だと思います。 まタグってタンパクとの相性もあるかも知れませんから、、、、

(無題) 削除/引用 No.1227-4 - 2009/09/22 (火) 20:58:14 - かんとりぃまぁむ 以前SCのHA抗体（ロットは忘れました）でIPしようとしたら全く駄目でFLAGに変えたらばっちりだったことがありました。 >IPはHAとかRIPA(0.1%SDSいり)でもしっかり落ちる印象があります。 ほかもIPに使えますけどね、、、 おおさんはどちらのHA抗体をお使いですか？まわりにIPをやっている人（分野的にも）が少ないのでご教授願えると幸いです。

(無題) 削除/引用 No.1227-3 - 2009/09/22 (火) 07:44:48 - おお マウスならMYCはエンドとクロスリアクトします。 ただタグ用の抗体でエンドをみるのは結構難しいですけど、 クロスリアクトすることは否定できないので mycでないといけない理由がなければ、それいがいが いいかもと思います。 あとのタグはどうでしょうかね、評価割れるんじゃないかな、、、 両方免疫染色でバックが出ると言う噂も聞きますが、 両方免疫染色でよく使われているタグでもあります。 IPはHAとかRIPA(0.1%SDSいり)でもしっかり落ちる印象があります。 ほかもIPに使えますけどね、、、

(無題) 削除/引用 No.1227-2 - 2009/09/20 (日) 12:29:56 - ami まあどうでしょうねえ。 ウェスタン、免疫染色、IPを行いたいのであれば、それらに適用可能な抗体があるor notがまず考えることでしょう。

Flag,Myc,HA等各エピトープタグの特徴＆選び方 削除/引用 No.1227-1 - 2009/09/20 (日) 09:41:34 - pos とあるタンパクをエピトープタグ付きで発現するトランスジェニック 動物を作成しようとしていますが、どのエピトープタグをつければ いいのかで悩んでいます。付加したタグを用いてウェスタン、免疫染色、 IPなどをしたいと思っています。 Flag,Myc,HA等各エピトープタグの特徴や選び方を教えていただくか もしくは解説しているリンクを教えていただけるととても助かります。 よろしくお願いします。

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