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DT40細胞に加えるgrowth factors トピック削除
No.1222-TOPIC - 2009/09/18 (金) 23:26:08 - ニワトリ
詳しい方がいたらご教授いただけるとありがたいです。

DT40を用いて実験しております。実験の目的上セーラム(FBS)をシグマから取り寄せていた、10kDaサイズで透析したセーラムで細胞を育てました。
しかし、細胞が3日ほどでセルは全滅してしまいました。
通常はバッチテストを行ったFBSで細胞を育てています(これをいつものFBSとします)。それに関しては平気です。

試しに自分で、”いつものFBS”を10kDaポアサイズの透析膜、0.15MのNaCl溶液で透析し、それを用いてDT40を育ててみました。やはり、細胞は3日ほどで全滅してしまいました。

ということから、FBSの10kDa以下の因子が透析でなくなることでDT40は育たなくなっていると考えました。そして、幾つかの増殖因子を加えてみたいのですが、そういった知識がないので皆さんにお尋ねしました。もちろんその因子が私たちが透析で取り除いているもの"X"だと困るのですが、それは無視してください。よろしくおねがいします。

ニワトリ
 
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(無題) 削除/引用
No.1222-4 - 2009/09/22 (火) 10:00:56 - ~
Cellのライセンスが無くて読めないのですが、
http://www.jbc.org/content/280/45/37763.full
の引用文献22で、化学合成培地を使ってDT40を培養しているようです。
中身が書いてあれば、参考になるのではないでしょうか。

http://www.tech.nedo.go.jp/PDF/100009181.pdf
に書かれているパシフィックバイオロジックス社(現東洋紡バイオロジックス社)が無血清培地での培養について論文や特許で発表していれば、そこに情報が書かれているかもしれません。

他にも無血清培地を用いている論文や特許を探せば、参考になると思います。

何も手がかりがないのであれば、極東のRD-1を試してみてもいいかもしれません。
鉄、亜セレン酸、エタノールアミン、インスリン(5.8kDa)の4つをカバーできます。
(たしか、シグマあたりでも同じ成分の添加剤を作っていたと思います)
ただ、DT40でのそれぞれの濃度が分かりませんので、ある程度点を振らないと効果があるか無いかが判断できないかもしれません。

(無題) 削除/引用
No.1222-3 - 2009/09/22 (火) 08:07:23 - おお
セレンとか微量金属が抜けやすいと思えますが、、、
あと亜鉛とか、、、

(無題) 削除/引用
No.1222-2 - 2009/09/19 (土) 00:57:11 - ami
>もちろんその因子が私たちが透析で取り除いているもの"X"だと困るのですが、それは無視してください。よろしくおねがいします。

ニワトリだけにそれは無視できません。なんちゃって。

DT40細胞に加えるgrowth factors 削除/引用
No.1222-1 - 2009/09/18 (金) 23:26:08 - ニワトリ
詳しい方がいたらご教授いただけるとありがたいです。

DT40を用いて実験しております。実験の目的上セーラム(FBS)をシグマから取り寄せていた、10kDaサイズで透析したセーラムで細胞を育てました。
しかし、細胞が3日ほどでセルは全滅してしまいました。
通常はバッチテストを行ったFBSで細胞を育てています(これをいつものFBSとします)。それに関しては平気です。

試しに自分で、”いつものFBS”を10kDaポアサイズの透析膜、0.15MのNaCl溶液で透析し、それを用いてDT40を育ててみました。やはり、細胞は3日ほどで全滅してしまいました。

ということから、FBSの10kDa以下の因子が透析でなくなることでDT40は育たなくなっていると考えました。そして、幾つかの増殖因子を加えてみたいのですが、そういった知識がないので皆さんにお尋ねしました。もちろんその因子が私たちが透析で取り除いているもの"X"だと困るのですが、それは無視してください。よろしくおねがいします。

ニワトリ

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