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Tizol 削除/引用 No.1191-6 - 2009/09/14 (月) 16:31:01 - ema ４年前からソート細胞でマイクロアレイやってますが、Trizol　LSダイレクトソートにしています。 PBS、培地等で回収して遠心して、、、の過程で結構死細胞がでてRNAのクオリティが悪い結果（一応予備実験しました）になるので。 その回収物でどうしてもチェックFACSしなければ（ソートうまくできたか）でなければダイレクトで。 固定は、、、勧めません。

(無題) 削除/引用 No.1191-5 - 2009/09/12 (土) 13:41:49 - tsururin ご存知かもしれませんが、こんなrefはいかがでしょうか。 http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6T30-4NH7DXD-1&_user=143915&_rdoc=1&_fmt=&_orig=search&_sort=d&_docanchor=&view=c&_searchStrId=1008949584&_rerunOrigin=google&_acct=C000011799&_version=1&_urlVersion=0&_userid=143915&md5=ffb95773d6f5bae944cd50a00db18574

(無題) 削除/引用 No.1191-4 - 2009/09/12 (土) 13:05:27 - RNeasy う様 教えていただき、ありがとうございます。流せる細胞数は臨床検体の為限りがあります。最終的な数も減らせません。しかたなく現在は比較的長めのRNAを回収して実験を行っています。ソーティング後培養することもあるため、生細胞を用いていますが、RNA抽出が目的の実験では、抗原のエピトープに影響がなければ固定細胞でも良いと思っています。 私が知っている市販のRNA安定化剤はRNAlaterのみです、原理が硫安による脱水を用いており、可逆的な不活化にすぎないため、FACSの前に処理しても役に立たないのではと思います。 来週にはAligent BioAnalyzerを用い、詳しいRNA分解の状況を調べ、そのデータをもとに、ボスと話し合おうと思っています。それ以前に何らかの対策をお聞きできればと投稿した次第です。 私の稚拙な質問でご気分を害させてしまい、申し訳ありませんでした。

(無題) 削除/引用 No.1191-3 - 2009/09/12 (土) 12:18:13 - 臭いご飯食べて腹痛で苦しい まずon ice操作は絶対ですね。 それからsortingし終えた後、培養して増やしたのちRNA抽出ではないですよね？ ならsortingの際に直接Trizolが入ったチューブで直接コレクトするとか。

(無題) 削除/引用 No.1191-2 - 2009/09/12 (土) 11:32:31 - う ＞FACS中にRNAが分解、または大きな変動を起こすのではないか心配です。なるべくRNAを安定化させつつ、FACSを行うにはどうすればよいのでしょうか？ まず、常識的に考える癖をつけたらどうですか。 生きた細胞を集めるつもりでしょうか？ ならば、活きがいいうちに。 数を集めるのに時間がかかるのならば、 しかたがないと思うか、 最初に流す細胞数を増やして短時間にするとか。

FACS後のRNA抽出 削除/引用 No.1191-1 - 2009/09/12 (土) 07:16:22 - RNeasy いつもお世話になっております。 FACSでリンパ球をソーティングしたのちRNA抽出を行う予定なのですが、FACS中にRNAが分解、または大きな変動を起こすのではないか心配です。なるべくRNAを安定化させつつ、FACSを行うにはどうすればよいのでしょうか？ 気をつけるべき点、使用したほうが良い試薬など、アドバイスをいただければ幸いです。よろしくお願いします。

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