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(無題) 削除/引用 No.1184-5 - 2009/09/11 (金) 14:42:09 - ゆりあ >[Re:3] 名無しさんは書きました : > 酵母はすごい硬いです。超音波ではかなり困難と思います。酵母の破砕にはグラスビーズで激しく震盪する方法がよく使われるけど、それでも結構苦労します。フレンチプレスとかクライオプレスもよく使われます。後者は酵母を凍結状態にしておいて強い圧力をかけてすりつぶすもので、生体物質のダメージを避ける事が出来ると思いますし、プロテアーゼの作用も抑えられる利点があるとおもいます。 > どんな方法であれ、どのくらい細胞が壊れているかどうか顕微鏡で確認しましょう。 貴重なご意見ありがとうございます。やはり超音波では難しいのですね。他の方法を考えて見ますが、破砕の結果は顕微鏡で確認するようにしますね。

(無題) 削除/引用 No.1184-3 - 2009/09/11 (金) 04:36:09 - 名無し 酵母はすごい硬いです。超音波ではかなり困難と思います。酵母の破砕にはグラスビーズで激しく震盪する方法がよく使われるけど、それでも結構苦労します。震盪中の泡立ちとかで酸化とか蛋白質の変性失活とかが心配ですし、もともと酵母はプロテアーゼ活性が高いのでそれの作用も問題になるかもしれません。フレンチプレスとかクライオプレスもよく使われます。後者は酵母を凍結状態にしておいて強い圧力をかけてすりつぶすもので、生体物質のダメージを避ける事が出来ると思いますし、プロテアーゼの作用も抑えられる利点があるとおもいます。 どんな方法であれ、どのくらい細胞が壊れているかどうか顕微鏡で確認しましょう。

(無題) 削除/引用 No.1184-2 - 2009/09/10 (木) 23:40:31 - ソニック 大腸菌を破砕するのと同じソニケータで酵母が壊れるとは思えません。 どういう機器でどういう条件で破砕されていますか？

酵母の破砕 削除/引用 No.1184-1 - 2009/09/10 (木) 22:37:43 - ゆりあ 酵母の菌体のタンパクを取り出すために、超音波で破砕しようと思っているのですが（出芽酵母）、みなさんはどれくらいの時間や強さで破砕していますか？大腸菌では30秒×５回とかが多いと思いますが、酵母はもっと時間をけないといけないと考えています。 また、破砕に用いる培養液はどれくらいのＯＤ値にしていますか？私が調べたところ、OD600=50〜100とあったのですが・・・ 参考アドバイスや文献等を教えていただければ幸いです。

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