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(無題) 削除/引用 No.1182-2 - 2009/09/11 (金) 12:14:43 - 名無し 取れているけど少ないので沈殿は壁にくっいてひろがったりして、沈殿が小さくばらばらになって眼ではっきり見えないだけではないでしょうか。培養細胞だと、眼でみてはっきり分かるくらいの量をとるのはかなりの数の細胞を要するように思います。10cm-dish１枚とか２枚とかくらのレベルだとしたらやっぱそんな感じではないかなと思います。とりあえずWBで適当なマーカー蛋白質（hsp60とか？）で細胞全体、核、ミトコンドリア、細胞質を比べて、ミトコンドリア画分に濃縮されているかどうかチェックすればどうでしょうか。

細胞質とミトコンドリアを分画する 削除/引用 No.1182-1 - 2009/09/10 (木) 20:48:57 - むいむい お世話になります。 癌細胞の細胞質とミトコンドリアの成分を分画してウエスタンをしたいのです。キットが市販されており、何度か試していますが、成功しません。 使っているキットはPIERCE Mitochondria Isolation Kit for Cultured Cellsです。 ミトコンドリア成分がマニュアルによるとペレットとして出てくるはずですが、出てきません。細胞数もマニュアルの通りか、むしろ多く用意しています。ダウンス型ホモジナイザーを使用するプロトコールと、ホモジナイザーを使用しなくてもいいプロトコールと両方試しましたが、やはりミトコンドリア成分をペレットとして手にすることができません。 このキットを使用したことがある方、あるいは、他のキットなどで同様の実験をしたことのある方、アドバイスをお願いします。

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