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(無題) 削除/引用 No.1174-4 - 2009/09/11 (金) 12:07:56 - 通りすがり 普通、2光子でもこれだけ深いとかなり厳しいので、グリセロール透徹は面白いアイデアと思います。問題は、屈折率がかなり変わるので、絵として撮れるか、でしょうか。

(無題) 削除/引用 No.1174-3 - 2009/09/11 (金) 00:21:31 - CJ でかい動物をグリセロール透徹することは可能です。皆さん骨を染めるアリザリン染色標本をごらんになったことはないでしょうか？あれは染色後にグリセリンに標本を漬け込むことで標本を透明にしているのです。

(無題) 削除/引用 No.1174-2 - 2009/09/10 (木) 19:36:55 - AP ホールブレインでも2-photonレーザー顕微鏡なら観察できるんですか。へー。 サンプルを載せるステージなんかはどういう風になっているんでしょうね。 そんなでかいホールマウントはまったく経験がないので、実際どういう道具立てになっているのか見当もつきませんが、スライドグラスにカバーグラスをかけて観察するレベルの、切片やホールマウントの感覚から言えば、標本の透過度は固定の問題と言うより透徹、マウントの問題だと思います。 たとえば、無蛍光グリセロールでマウントすれば同時に透徹されますね。 例えば、固定脳をグリセロール漬けにして透徹するなんてことは出来ないでしょうか。

光の透過率の高い固定方法はないでしょうか？ 削除/引用 No.1174-1 - 2009/09/09 (水) 14:09:43 - たー 初めて投稿します。宜しくお願いいたします。 私は顕微鏡機器共通センターに務めており、そこで2Photon顕微鏡を使っているユーザの研究者の方についての相談です。 神経細胞にEYFPを発現させたマウスのホールブレインのホルマリン固定標本を作製し、2Photonレーザ顕微鏡で観察し、400-500ミクロンくらい奥にあるニューロンの細胞体を観察したいです。 うまく見えることもありますが、300nmくらいより下側がどうしても見えないことが多いです。 ホルマリン固定すると組織が白く濁るので光の透過率が悪くなっているのだと思います。うまく見える時と見えない時があるのがどうしてかは、不明です。 YFPが強く光っているのは明らかで、スライスを作成してみると間違いなく細胞体が光っています。 生体マウスならば透過率が高いことはわかっているのですが、毎回生体マウスを用意するのは大変ですし、ニューロン細胞体まで見えるホールブレインのサンプルが安定してつくれるようになれば、メリットが大きいです。 光の透過率の高い固定方法はないものでしょうか。

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