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(無題) 削除/引用 No.1164-4 - 2009/09/13 (日) 21:00:55 - PYK 血清入りでも無しでも、おおむねどんな細胞でもノックダウンできますよ。 私がやった感じでは、「落ち」には変化はなさそうです。 私は培地交換が手間なので、最近は血清入りでしか行っていません。 周りの人もそれでうまくいっていて、血清が問題になったことはないですね。 ただ、プラスミドのtransfectionは血清があると入らなくなった経験があります。

ありがとうございます 削除/引用 No.1164-3 - 2009/09/10 (木) 08:17:07 - つん PYK様、ありがとうございます。 血清入りの培地を使用した場合と、すべてOPTI-MEMを使用した場合ではトランスフェクション効率に影響（違い）はあるのでしょうか？ 細胞種によっても異なるのかもしれませんが… もしご存知でしたら教えてください。

(無題) 削除/引用 No.1164-2 - 2009/09/07 (月) 15:03:24 - PYK どちらもありですよ。 私は血清入りの培地に、Opti-MEM中で反応させたsiRNA + RNAiMAXを添加しています。 今までこのやり方でノックダウンできなかったことはないです。(siRNAの配列などの影響を考慮しなければ)

OPTI-MEMの使い方 削除/引用 No.1164-1 - 2009/09/07 (月) 13:44:51 - つん こんな質問をするのは恥ずかしいのですが… Invitrogen社のStealth select RNAiのトランスフェクションにLipofectamine RNAiMAXを使用しています。 ラボの人と話しているときに 「もしかして私の使い方、間違ってる？（添付文書の解釈、間違えてる？）」 と思うことがあり、この場をお借りして確認させていただければと思っております。 細かいところは省略させていただきますが、次のような流れで使用しています。 トランスフェクション前日 　１）抗生物質不含の培地に細胞をまく。 トランスフェクション当日 　２）OPTI-MEMとsiRNAを混ぜる 　３）OPTI-MEMとLipofectamineを混ぜる 　４）２と３を混ぜる 　５）４を１に滴下して混ぜる 　６）実験に用いるまでインキュベーション 問題はステップ5で、 （前日に撒いたままの）抗生物質不含培地に滴下するのか、 OPTI-MEMに培地交換してから滴下するのかということです。 （後者の場合、トランスフェクションの3-4h後に、抗生物質含有の普段の培地に交換する） どちらもありなのでしょうか？

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