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(無題) 削除/引用 No.1083-6 - 2009/08/23 (日) 18:20:10 - AP 競合PCRというかmultiplex PCRで、複数のターゲットを同時に増やすと言うのは結構難しいです。ターゲットの配列、長さ、プライマーの利用効率などで、増幅効率が違い、増え負ける方はintensityが低いだけならまだましで、まったく見えないことも普通にあります。うまくやるには、プライマーをいろいろ試して、いい組み合わせを見つけるという条件検討が唯一の解決法で、プライマー濃度や温度プログラムなどほかの条件をいじってうまくいくようになることは、ほとんど望みないです。 multiplex PCRが難しいことは周知のことで、だからこそこういう製品も開発されているわけです（タカラの回し者ではありません。私は使ったことないですが）。 ttp://catalog.takara-bio.co.jp/product/basic_info.asp?unitid=U100005170 (link修正しました）

(無題) 削除/引用 No.1083-4 - 2009/08/23 (日) 11:18:58 - おお 両方のプライマーを加えればうまく行くんじゃないかって たいてい思うわけですが、やはりうまく行く条件がせばまったり、 プライマーの相性とかでそう単純には行かなかったりします。 別々でワークしているのでしたら、それでやっていけばいいのでは と思います(酵素、条件を工夫して改善できる可能性は あると思いますが、それに時間など費やすのが得策かどうか というのは考えてみてもいいのでは、、、 まPCR初心者のひとや学部せいのひとがPCRのテクニカルな 面での理解や条件の決め方などで一通りやってみるというので あればそれはそれでいいかもしれませんが)。

(無題) 削除/引用 No.1083-3 - 2009/08/21 (金) 15:24:08 - ami 別々にやる

(無題) 削除/引用 No.1083-2 - 2009/08/21 (金) 14:20:19 - こうじ 別のKOのタイピングですが、経験では PCRにつかう酵素かえる DNAの取り方かえて純度をあげる プライマーデザインを変える こんな対処していました

Genotyping　バンドが消えてしまいす 削除/引用 No.1083-1 - 2009/08/21 (金) 11:17:17 - あ 現在、tPA＋/−マウスのgenotypingをしていますが、 KOとWTのprimerを別々にしてgenotypingを行うと、WTとKOのバンドが出て、 ヘテロの判断ができるのですが、KOとWTのprimerを一緒に入れて　genotypingを行うと、 kOのバンドは出るのですが、WTのバンドが消えてしまいます。 競合してしまっているのではと考え、KOのPrimerの濃度をかなり低くしたのですが やはりKOのバンドしか出ません。 いままで同じようなご経験のあるか方がいらっしゃいましたら、ご助言いただけないでしょうか。 よろしくお願いします。

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