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Flow cytometryが詰まる なにか良い方法を トピック削除
No.1081-TOPIC - 2009/08/21 (金) 08:08:41 - ストレイナー
Flow cytometryが詰まって困っています。なにか良い方法を教えてください。

BD社のセルストレイナー(ブルーキャップのメッシュ)を通しています。マシンはFC500(ベクトン)もしくはFACSCaliburです。エタノールで固定した細胞を使用。自分でした工夫としては、RNases処理を2時間ほどする、セルストレイナーを二回通すなどですが、少々良くなるか?くらいです。セルストレイナーはピペットチップを当ててピペットに吸ったものを吐き出すようにしていますがよろしいのでしょうか?
 
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No.1081-6 - 2009/08/21 (金) 20:11:59 - ストレイナー
みなさん、コメントをありがとうございます。

>取り込み中につまるのですか?取り込み速度はいかほどですか?>チューブの細胞濃度が濃すぎるのではないでしょうか。
はい。メーカーによると推奨最大速度は500/Sですが、約80/Sでもよくつまります。確かに、低い速度のほうがベターです。

>実験終了時に5分10%Conrad,5分イオン水を取りこんで終了しています。
FC500(すいませんコールターでした)は最後に専用の洗浄液や蒸留水で洗うことになっており、問題ないはずなのですが。

>細胞の種類は
Saos-2、Calu-6などです。

>まず、機械のメンテナンスをされたらどうでしょうか。
>これまで、FACSCaliburにいろいろな細胞(接着性の高いものとかも)を流してきましたが、
そこまで詰まるか?と。

たしかに、メーカーに相談するのも筋ですね。

ありがとうございます!

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No.1081-5 - 2009/08/21 (金) 19:57:57 - う
まず、機械のメンテナンスをされたらどうでしょうか。

これまで、FACSCaliburにいろいろな細胞(接着性の高いものとかも)を流してきましたが、
そこまで詰まるか?と。

(無題) 削除/引用
No.1081-4 - 2009/08/21 (金) 18:22:09 - DC
チューブの細胞濃度が濃すぎるのではないでしょうか。
また、使用後にハイター処理などして洗浄操作をしないと詰まります。
もしこの操作をしていないのであれば、前に使用した時に詰まっていた流路がまだ詰まったままのために、今細胞調製をどれほど工夫しても詰まってしまう、という現象が見られているだけでは?

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No.1081-3 - 2009/08/21 (金) 15:24:45 - ami
細胞の種類は

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No.1081-2 - 2009/08/21 (金) 14:40:07 - uu
取り込み中につまるのですか?取り込み速度はいかほどですか?
うちのラボはCantoですが、実験終了時に5分10%Conrad,5分イオン水を取りこんで終了しています。
取り込み中につまるのなら、上記以外には細胞濃度を薄めてみるか、検体処理の際にDNAse処理をするくらいしか思い浮かびませんが。
メンテされていないとチューブに結晶やかすがこびりついてることもありますが。。。

Flow cytometryが詰まる なにか良い方法を 削除/引用
No.1081-1 - 2009/08/21 (金) 08:08:41 - ストレイナー
Flow cytometryが詰まって困っています。なにか良い方法を教えてください。

BD社のセルストレイナー(ブルーキャップのメッシュ)を通しています。マシンはFC500(ベクトン)もしくはFACSCaliburです。エタノールで固定した細胞を使用。自分でした工夫としては、RNases処理を2時間ほどする、セルストレイナーを二回通すなどですが、少々良くなるか?くらいです。セルストレイナーはピペットチップを当ててピペットに吸ったものを吐き出すようにしていますがよろしいのでしょうか?

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