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(無題) 削除/引用 No.1059-5 - 2009/08/24 (月) 08:30:56 - う 光ります。

(無題) 削除/引用 No.1059-4 - 2009/08/22 (土) 15:55:15 - 腸管 気になったんですが 固定してもGFPって光るんでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.1059-3 - 2009/08/19 (水) 18:46:16 - う まずは、FACSを教えてくれた研究室の方に実際に見てもらいながら、 FACSにかける前の細胞の状態を顕微鏡で見てもらったり、 ゲートのかけかたを見てもらったり、 展開の仕方を見てもらったり、 してもらいましょう。それが一番の近道。 どうしてもここを利用しなければならない理由がある（？）のなら、 もう少しどのような状況なのか書かないとよくわからないです。

(無題) 削除/引用 No.1059-2 - 2009/08/19 (水) 16:26:46 - Q あなたが問題としていることは 1.組織から細胞が採取出来ているか否かということ。 2.GFP発現細胞をFACSで検出できるか否かということ。 に分けられますが、FACSのPCを置き忘れているので 2.の回答を得ることは出来ないでしょう。 また、1.についての情報もトリプシン処理をしたのみですので これもまた回答を得ることはできないと思います。

FACSがうまくいきません。 削除/引用 No.1059-1 - 2009/08/17 (月) 12:04:12 - g いつもお世話になっています。 FACS初心者で分からないことが多く、教えていただきたいのですが、 マウス胚のある組織の特定の細胞集団における細胞周期解析を行おうと考えています。 その細胞集団がGFP蛍光で識別できるトランスジェニックマウスを使用しているので、目的の細胞集団はGFP蛍光でゲートできるようになっています。 ですが、実際に実験を行ったところ全くその細胞集団をえることができませんでした。 組織全体をトリプシン処理、4% PFA/PBSで固定したのち、DAPI染色をおこなっています。 そうすると1×10＾5 くらい細胞がえられます。論文などからそこから数千の目的の細胞が得られると予測していたのですが、全くその細胞集団をえることができませんでした。 蛍光が弱いのか、別に理由があるのかよく分からずにいます。 光っていない同じ組織を用いて同様な処理を行ったネガコンはおいてやったのですが、PCはおきわすれてしまいました。 なにかこのような少数の細胞集団を得るときに注意すべきことはありますでしょうか？ わかりにくい文章で申し訳ありません。 何かアドバイスいただければ幸いです。

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