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(無題) 削除/引用 No.1033-5 - 2009/08/13 (木) 00:54:49 - AP >感度は高くないですが、標的がrRNAとのことなので、めちゃくちゃコピー数が多いはずなので感度は足りるかと思います。 というかTSAで増感する必要があるのかしらん。

(無題) 削除/引用 No.1033-4 - 2009/08/13 (木) 00:53:00 - AP それに加えて、アビジン（ストレプトアビジン）-POが必要なようですね。任意の方法で一次標識や、それを捕捉してPO標識をつけることができるように、それに関する試薬は同梱になっていないようです。 5'末端標識ということは、オリゴヌクレオチドプローブでしょうか。CJさんの懸念のように感度は高くないですが、標的がrRNAとのことなので、めちゃくちゃコピー数が多いはずなので感度は足りるかと思います。むしろプローブ配列の複雑さが足りないゆえの非特異的ハイブリや、プローブの短さからのduplexの不安定さが問題になるかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.1033-3 - 2009/08/12 (水) 21:37:34 - CJ と書いたのですが、もしかして私とんでもない勘違いをしてますか？プローブ末端のみ標識、という意味と解釈しましたが、違いました？

(無題) 削除/引用 No.1033-2 - 2009/08/12 (水) 21:17:37 - CJ 私はCARD-FISHというのはやったことがないので、参考意見ですが、 末端しか標識されていないんですよね？それじゃああまりにも感度が低すぎると思います（標的あたり1分子しかビオチンがついてない）。私はＴＳＡでFISHを良くやりますが、通常はＵＴＰを標識してやります。ＴＳＡはアルカリフォスファターゼを使った検出法より感度が低いのでなおさらです。 ＵＴＰを標識してはいけない理由はあるのですか？

TSAによるCARD-FISH 削除/引用 No.1033-1 - 2009/08/12 (水) 09:20:58 - 文子 rRNAをターゲットとし、パーキンエルマー社のキット（TSA Plus Cyanine 3 system）を用いTSA-FISH（CARD-FISH）法でCy3の蛍光強度の増幅を行おうと考えているのですが、手元に5´末端をビオチンで修飾したprobeしかありません。 可能でしょうか？

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