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高分子量タンパク質のSDS-PAGEについて トピック削除
No.1022-TOPIC - 2009/08/10 (月) 13:36:01 - アキラ
こんにちは。

現在SDS-PAGEで高分子量のタンパク質の検出を試みています。
検出されるであろうタンパク質の分子量は、約600kDa、1200kDaであることが考えられるのですが、SDS-PAGEで検出するにあたり適当な分子マーカーが見つからず困っています。
(ちなみに現在用いているマーカーはinvitrogenの"HiMark Unstained Molecular Weight Protein Standard"で、上限が500kDaです。)

また、マーカーではなく600kDa、1200kDaに相当するタンパク質がメーカーから販売されているのかどうかも検討しましたが、全く見つからないという状況です…。

初心者的な質問で恐縮ですが、500kDa以上のタンパク質をSDS-PAGEで検出された方がいたら、その時にどのようなマーカーあるいはタンパク質を用いていたかご教授いただけないでしょうか?
どうぞよろしくお願いします。
 
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(無題) 解決済み 削除/引用
No.1022-6 - 2009/08/12 (水) 10:24:46 - アキラ
>oioiさん

「ダイマーじゃね?」

ご指摘ありがとうございます。
仰るように分子量的に目的タンパクが多量体を形成していると思います。
(適当なマーカーがなく、確証はないのですが・・・。)
今回はそのダイマーなりが形成されているということを、適当なマーカーを用いてSDS-PAGEで確認したいと考えています。


>おおさん

おおさんの仰った”インビトロジェンのBNPAGE用のマーカー”を少し調べてみましたが、チェックする価値はありそうですね!!
アプリケーションを見てみると、今回の実験に適用できそうです。
どうもありがとうございました!!

(無題) 削除/引用
No.1022-5 - 2009/08/11 (火) 12:22:16 - おお
>[Re:4] oioiさんは書きました :
> ダイマーじゃね?

ネイティブ用のマーカーはたまにコンプレックスをとって
いる状態でマーカーとしてのサイズを示すものがあるので
きをつけないといけませんね。
インビトロジェンのBNPAGE用のマーカーはどうなんでしょうか?
自身を持って使えるといえませんが、チェックしてみても
いいのではないでしょうか、、、、、

(無題) 削除/引用
No.1022-4 - 2009/08/11 (火) 11:53:58 - oioi
ダイマーじゃね?

(無題) 削除/引用
No.1022-3 - 2009/08/10 (月) 20:18:40 - アキラ
>あかねさん

どうもありがとうございます!!

「Thyroglobulin; 669kDa,GE から出ていると思います。
ゲル濾過のマーカーとして使っていました。」

このような製品が出ていたのですね。
この製品の"Thyroglobulin"をSDS-PAGEに用いる方向で考えてみます!

(無題) 削除/引用
No.1022-2 - 2009/08/10 (月) 20:09:38 - あかね

Thyroglobulin; 669kDa,
GE から出ていると思います。
ゲル濾過のマーカーとして使っていました。

高分子量タンパク質のSDS-PAGEについて 削除/引用
No.1022-1 - 2009/08/10 (月) 13:36:01 - アキラ
こんにちは。

現在SDS-PAGEで高分子量のタンパク質の検出を試みています。
検出されるであろうタンパク質の分子量は、約600kDa、1200kDaであることが考えられるのですが、SDS-PAGEで検出するにあたり適当な分子マーカーが見つからず困っています。
(ちなみに現在用いているマーカーはinvitrogenの"HiMark Unstained Molecular Weight Protein Standard"で、上限が500kDaです。)

また、マーカーではなく600kDa、1200kDaに相当するタンパク質がメーカーから販売されているのかどうかも検討しましたが、全く見つからないという状況です…。

初心者的な質問で恐縮ですが、500kDa以上のタンパク質をSDS-PAGEで検出された方がいたら、その時にどのようなマーカーあるいはタンパク質を用いていたかご教授いただけないでしょうか?
どうぞよろしくお願いします。

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