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(無題) 削除/引用 No.1021-5 - 2009/08/11 (火) 13:05:05 - g ご意見ありがとうございました。 とりあえず、4% PFAで固定してDAPIで解析してみようと思います。 また何かありましたら、よろしくお願いいたします。

(無題) 削除/引用 No.1021-4 - 2009/08/10 (月) 11:34:07 - ~ 生細胞に取り込まれやすいのはHoechst 33342ですね。 33258は生細胞では取り込まれにくいです。 固定および透過化処理なしでのeGFPとの2色解析の例がありました。 http://www.bc-cytometry.com/application/appli_topics23.html sub G0/G1が見れているようです。

(無題) 削除/引用 No.1021-3 - 2009/08/10 (月) 11:27:16 - おお >[Re:2] TK-1さんは書きました : > 未固定でDAPIで染めて、細胞周期ってみれるんですか？Liveの細胞ならDAPIを排出するので、DNAはほとんど染まらないと思いますけど、それが一般的なんでしょうか。Hoechstも同じだと思います。 膜透過性のHoechstがありますね。生きている細胞でも核がそめれます。 番号がちょっと違うんですが、、、、、何番かはちょっといまは、、、

http:// 削除/引用 No.1021-2 - 2009/08/10 (月) 11:19:51 - TK-1 UV laserがあるのであれば、固定してDAPI。 PIはRNAも染まるので、permeabilizationしてRNase処理が必要です。 未固定でDAPIで染めて、細胞周期ってみれるんですか？Liveの細胞ならDAPIを排出するので、DNAはほとんど染まらないと思いますけど、それが一般的なんでしょうか。Hoechstも同じだと思います。

GFP陽性細胞の細胞周期解析 削除/引用 No.1021-1 - 2009/08/10 (月) 10:12:06 - g 初めまして。教えていただきたいことがあります。ある遺伝子の下流にGFP遺伝子をいれたTGマウスについてそのGFP陽性細胞における細胞周期をFACSで調べたいと考えています。 GFP陽性細胞が少量なため、ソーティングは行いません。Propidium Iodido(PI)をFACSで見るときは70%エタノールで固定＆膜透過処理がスタンダードのようなのですが、GFP陽性細胞ではGFPが流出してしまうことから固定は4%PFA/PBSで行おうと思っています。 また、GFPの局在場所が細胞質なため、Triton-Xを用いての膜透過処理が難しいように考えているのですが（実際うまくいきませんでした）、このような場合、どのような固定＆膜透過処理等を行っておられるのでしょうか？ 未固定の細胞を、HoechstやDAPI等で染める方が良い結果が得られるのでしょうか？よろしくお願いします。

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