Bio Technical フォーラム

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セルソーティングのための細胞の免疫蛍光染色について トピック削除
No.9982-TOPIC - 2021/10/16 (土) 04:46:55 - Sm
間葉系幹細胞に免疫蛍光染色を行い、セルソーティングを行っているのですがほとんど蛍光が検出できません。

二次抗体はFITCで標識されたものを用いています。
バッファーは100 mMのEDTA 1 mLと5 %BSAを5mL含んだ50mLのものを作製して用いています。

何か考えられる原因がございましたら、ご教授頂きたいです。
 
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(無題) 削除/引用
No.9982-2 - 2021/10/16 (土) 07:57:02 - ほぼ
実験において最も重要なのは、ポジコンです。
以下の二点などをご確認されてはいかがでしょうか。
1. 間葉系細胞を100%確実に標識できる抗体で検出できているかどうか
2. 100%確実に標識できる他の細胞と交代の組み合わせは検出できているかどうか
細胞なのか、一次抗体なのか、二次抗体なのか、
問題を切り分けるための実験によりトラブルシュートなさっては如何でしょうか。

セルソーティングのための細胞の免疫蛍光染色について 削除/引用
No.9982-1 - 2021/10/16 (土) 04:46:55 - Sm
間葉系幹細胞に免疫蛍光染色を行い、セルソーティングを行っているのですがほとんど蛍光が検出できません。

二次抗体はFITCで標識されたものを用いています。
バッファーは100 mMのEDTA 1 mLと5 %BSAを5mL含んだ50mLのものを作製して用いています。

何か考えられる原因がございましたら、ご教授頂きたいです。

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