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(無題) 削除/引用 No.9944-5 - 2021/10/03 (日) 05:39:46 - おお >[Re:3] uverさんは書きました : > ＞温度を下げることでdishから細胞を脱離できる特殊な材質の培養シャーレが売ってる > 調べたのですが、細胞をシートごとはがすシステムは見つけましたが、個細胞化できるシャーレも存在しますか？ > > 多分upcellだと思うけど https://www.cellseed.com/en/pdf/business/product/product_data_en.pdf 7. Protocol for macrophage collection in single cell suspension 8. Protocol for dendritic cell collection in single cell suspension. ものは使いようだと思います。細胞間の接着が強くないなら、バラけるだろうから対数増殖後期で剥がしてもSingle Cellになりやすい。これを使って剥がれてきた細胞をEDTAなどを使って懸濁したら普通のDishからEDTAを使って無理やり剥がすよりダメージが少ないでしょう。 もし細胞間の接着が強いなら、細胞がまばらなときに回収すればSingle cellとして回収しやすいのは察しがつくし。

(無題) 削除/引用 No.9944-4 - 2021/10/03 (日) 04:41:06 - uver 今のところピペッティングだけでも半分くらいははがれることは確認したのですが、ピペッテイングをやりすぎると、細胞の本体は外しますが、突起のような足場は一部シャーレに残っている？のが観察できるので、これも細胞破壊なんだろうなと愚考しています。非酵素性剥離剤も細胞死を引き起こすとなると、酵素以外の方法は本末転倒と思えてきました。 トリプシンかaccutaseによるマイルドな処理でしょうかね。。。

(無題) 削除/引用 No.9944-3 - 2021/10/03 (日) 04:38:58 - uver ＞温度を下げることでdishから細胞を脱離できる特殊な材質の培養シャーレが売ってる 調べたのですが、細胞をシートごとはがすシステムは見つけましたが、個細胞化できるシャーレも存在しますか？

温度感受性dishtokaha 削除/引用 No.9944-2 - 2021/10/01 (金) 20:43:01 - qwerty もちろん表面抗原の中にはトリプシンで分解を受けるのもあるでしょうから、それによって抗原性が大きく影響受ける可能性はあります。 そういう問題を回避するため、温度を下げることでdishから細胞を脱離できる特殊な材質の培養シャーレが売ってるので、そういったものを使用されてはどうでしょうか。 細胞間接着はEDTAとピぺっティングでである程度は解離できると思いますが、長すぎると細胞のCaホメオスタシスにも影響が出てくると思うので注意が必要とは思います。

非酵素性細胞剥離液を使うと・・・ 削除/引用 No.9944-1 - 2021/10/01 (金) 16:33:32 - uver 非酵素性細胞剥離液を使うと、トライパンブルーで10-20%ほど、死細胞が増える気がするのですが、気のせいでしょうか？ 細胞と細胞の相互作用を研究したいため、トリプシンを使わない方がいいかなと考えたのですが、本末転倒な気がしてきました。 そもそも細胞の相互作用の解析にトリプシンを使ったらよくないのでしょうか？表面抗原は破壊されるのですか？

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