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(無題) 削除/引用 No.9941-9 - 2021/10/01 (金) 09:22:33 - noname 6Hisタグを使われていると思いますが、 6HNタグに変更すると低イミダゾール濃度で 溶出できるので、こちらも検討してみるのも手かもしれません。

(無題) 削除/引用 No.9941-8 - 2021/09/30 (木) 17:26:49 - 散々 Gold Biotechnologyって会社のImidazole, recrystallized って製品を、日本ではフィルジェン株式会社ってところで扱ってるな。 １００gで５万円。

(無題) 削除/引用 No.9941-7 - 2021/09/30 (木) 15:17:40 - おお 56749 Sigma-Aldrich Imidazole BioUltra, ≥99.5% (GC) この商品は２８０nmの吸収がひくく、例えば１Mの溶液として売っている 68268 Sigma-Aldrich Imidazole buffer Solution BioUltra, 1 M in H2O でUV - ABS. AT 280 NM≤ 0.08 ただし、56750の商品の４倍ぐらい（だっけ）の値段になっている。２８０nmに吸収がある不純物を除くのは相当手間がかかりコストがかかるようにも思える。 値段とか商品とかよくわからないが、東京化成とかはケミカルでしっかりした商品を扱っているので、問い合わせてみてもいいのかも。 自分で再結晶というのも選択肢ではありますね。むかし有機溶媒でいろいろ生物材料からものを抽出している人が、試薬特級でも汚いと言って再蒸留してから使っているという人がいたという噂を聞いたことがある。

(無題) 削除/引用 No.9941-6 - 2021/09/30 (木) 14:37:40 - あかね ぽーさま、 コメントありがとうございます。今回はダメです。 液クロでimidazole gradientで標的ヒスタグ蛋白質を溶出するのですが、imidazole濃度が高くなるにつれてOD280のバックグラウンドが上がってきます。なので、純度の高いimidazoleを求めています。 おおさま、 コメントありがとうございます。 今回は、代替法を検討してみては、というよりは、使える（比較的安価でかつ高純度の）イミダゾールを探すというのがトピックの趣旨です。商品によって明らかにOD280の吸光度が違うようなので。 でも、コメントありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.9941-5 - 2021/09/30 (木) 14:34:56 - 散々 SpectraBaseのサイトでみる限り、 230nm以上で吸収はゼロなので、純度の問題なのでしょう。 自分で再結晶してから使用するとか。

(無題) 削除/引用 No.9941-3 - 2021/09/30 (木) 14:09:58 - おお How does imidazole affect my quantitation of protein? FAQ ID -132 Since imidazole absorbs UV radiation at 280 nm, an elution profile measured at 280 nm while purifying a 6xHis tagged protein by FPLC will show an increase in absorbance above the background signal allowing quantitation of your protein. The absorbance of imidazole can vary depending on its source and purity, but elution buffer containing 250 mM imidazole usually has an A280 of 0.2–0.4. https://www.qiagen.com/us/resources/faq?id=6a331f4d-8716-4adf-992c-298fdddbb0be&lang=en 吸収が２８０nmで０というわけでもなさそうですけどね。 イミダゾールじゃなく芳香族を含まないアミノ酸などアミンを含むもので溶出するとかpHを下げるとかして溶出してみるのも手かもしれません。

(無題) 削除/引用 No.9941-2 - 2021/09/30 (木) 13:27:02 - ぽー PD10カラムなどを利用して、イミダゾールを除去するのではダメなんでしょうか？

高純度イミダゾールのメーカー 削除/引用 No.9941-1 - 2021/09/30 (木) 13:07:14 - あかね ヒスタグ蛋白質の精製にイミダゾールを普段から使っています。 FPLCなどでOD280nmで吸収が少ない、高純度のイミダゾールを探しています。おすすめのメーカー＆型番を教えてくれませんか？ 現在、wako(Fuji)のイミダゾール(099-00013, 精製度98%)を使っているのですが、OD280に吸収があるためFPLCなどで使う際に、OD280のバックグラウンドが高くなってしまいます。 高純度のイミダゾールだとOD280には吸収がないとのことなので、SIGMAのイミダゾール(56750,> 99.5%)を購入したのですが、OD280を測ってみるとwakoのイミダゾールより高い吸収が確認されました。しかも、溶液の色が（粉末もですが）黄色ですし、、、（wakoイミダゾールは無色透明）。 SIGMAのイミダゾールは、純度が高いはずだったのに、期待外れの結果となりました。 この商品は吸収がなくて使えるよ、などオススメがあればお願いします。

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