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(無題) 削除/引用 No.9933-5 - 2021/09/28 (火) 18:06:14 - AA 1対17というのが実数なのかどうかにもよりますが、18匹中1匹が野生型ほかがヘテロということであれば、単に偏りということもあります。 1/2のn乗をすると確率的になさそうにも思えますが、割とよく聞くケースで、 私自身も(flox/flox)マウスと(flox/flox);(Cre/wild)マウスの交配で2腹まるまるCreマウス得られなかった経験があります。 親の遺伝子型を再確認しても正しかったので、以後そういうケースに出会っても、まぁそういうものかと思ってサンプルサイズが大きくなるまでは深く考えないようにしています。

(無題) 削除/引用 No.9933-4 - 2021/09/28 (火) 16:51:19 - ema 同じような現象に過去になったことがあります。 その時は子供の体の大きさがKO＜WT＜Heteroと明らかに差がありました。 諦めて、WTは購入したB6でコントロールにしました。 ＞こちらで購入したB6を掛け合わせると、１：１で生まれましたその同腹の子同士で今回交配 すべての交配でそうなっているのではなかったら、組み合わせを変えて理論値にはならないと思いますがもう少しバランスがましなペアを探す、数回HeteroをB6バックしてからHeteｘHeteを試す はやったことがあります。

(無題) 削除/引用 No.9933-3 - 2021/09/28 (火) 11:40:13 - マウスブリード ぽー様 ありがとうございます。 はい、企業から送られてきたヘテロマウスと、こちらで購入したB6を掛け合わせると、１：１で生まれましたので、その同腹の子同士で今回交配をかけた次第です。 今回のgenotypingで用いるPCR-RFLPの際には、B6のゲノムをコントロールとして用いており、それではバンドは綺麗に二つに見えました（PCR産物の完全消化）。一方、1匹を除いた全てのpupsではundigestedのものと、WTで見られる消化断片の合計3本が綺麗に見えました。 一匹のみWTの完全消化の2バンドが見えました。 今回、ホモマウスを得ることを目的としていますが、ホモの場合に本当にPCR-RFLPで全く切断されないかはデータとしては持っていません。プラスミドで変異体を作ってそれを鋳型にPCRをして、ホモのpositive controlを作るべきだとは思っていますが、それでもWTがほとんど出ないというのは別の問題のような気がして、そちらを今考えています。

(無題) 削除/引用 No.9933-2 - 2021/09/28 (火) 08:56:16 - ぽー 確認したいのですが、ヘテロとWTを交配させた場合は１：１に生まれるんでしょうか？

ノックインマウスのヘテロ同士の交配での謎な現象 削除/引用 No.9933-1 - 2021/09/28 (火) 08:41:12 - マウスブリード おはようございます。 早速ですが、私はある遺伝子の一塩基置換を持つマウスのホモを作製中です。 現在、雄雌共にヘテロ同士で掛け合わせをしているため、メンデルの法則によれば野生型、ヘテロ、ホモは1:2:1で産まれるはずですが、不思議なことに、1:17:0という結果がこれまでのpupsの遺伝型でした。 ホモは致死の可能性があるため0でもよいかと思いますが、野生型がここまで少ないのはとても気持ちが悪いです。 このマウスはグローバルにその一塩基置換を持っています。 ジェノタイピングは通常の一塩基置換を区別するPCRがワークしないため、一手間かかりますが一塩基置換部位をフランクした領域をPCRで増幅し、その産物をRFLPにて遺伝型の判定をしています。RFLP自体はうまくいっており、WTでは切断された2本の断片が見え、ヘテロでは3本が見えます。ホモはまだできていないためRFLPで1本のバンドになるかどうかはわかりませんが、理論的にはなります。 大変長くなりましたが、ヘテロ同士の交配で、野生型が産まれにくいようなことはやはり何か交配が間違っているのでしょうか？PCR反応液にヘテロのゲノムがコンタミはされていなさそうです。pupsのtoeを切る際にハサミを毎回ワイプはしていますが、それでもヘテロの組織片が野生型やホモのサンプルに混入したのかも考えています。可能性は低そうですが。 このようなことにつき、大変困っています。 コメントいただけましたら幸いです。

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