Bio Technical フォーラム

  • バイオ関連の実験をする上での、試薬、機器、プロトコールなどの情報交換の場です。
  • 新しいテーマで話を始める場合、質問をする場合は「新しいトピックを作る」から書き込みをしてください。
  • 質問に対して解答できる方は是非、書き込んで下さい。
  • このフォーラムにふさわしくないと管理人が判断した投稿は予告なく削除します。

新しいトピックを作る　|　トピック一覧　|　研究留学ネットに戻る

ひとつ前のフォーラム（readのみ）

このスレッドをはてなブックマークに追加このスレッドをはてなブックマークに追加

U937をマクロファージに分化させたい トピック削除
No.9913-TOPIC - 2021/09/14 (火) 21:30:53 - Sam
U937をマクロファージに分化させたいと考えています。

過去の文献を読んで、もっとも一般的に見えた100ng/mlのPMAをRPMI+10%FBSに添加して、2日培養したのですが、5%ほどしか細胞が接着しません。

形態も論文と異なり、球状で、ディッシュにくっついていて、癌細胞のような形態変化を示しません。

貪食能も低いです。何かアドバイスありますでしょうか。PMAの濃度に関しては、3ug/mlの方もごく少数いるので、現在増量を試みているのですが、逆に100ng/mlだと濃すぎて毒性が出ている可能性もあるのかなと愚考しています。

あるいは細胞自体に問題があるのでしょうか。。。簡単に思えた細胞の準備に苦労しています。
　
- このトピックにメッセージを投稿する -



全5件 ( 1 〜 5 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用
No.9913-5 - 2021/09/21 (火) 10:16:20 - にゅーろとろふぃん

> 形態は球状から癌培養細胞が接着したようなやや透明な状態になりましたか？論文を見ると癌細胞のように、結構長い仮足が出ているようなデータもあれば少しだけ球に歪みが出ている程度の論文もありました。


うちのラボで取り扱っているU937細胞は仮足はでません。アメーバ状になります。形態での判別が不安なのであればマーカーの発現量で評価したらいかがですか？


> どれくらいの割合が接着して生存しますか？昔の文献を見ると8割、9割と言った驚異的な数字の論文もありました。貪食率もかなり高いでしょうか？

大体40〜50％ほどの分化率で生存率はPMA添加後72時間で80％ほどです。
貪食能評価はうちではあまり重要視する項目ではないので行っておりません。

(無題) 削除/引用
No.9913-4 - 2021/09/15 (水) 22:24:55 - vghu
他所でほぼ同じ質問と回答があった。参照ください
ttps://www.researchgate.net/post/What-is-the-detailed-mechanism-of-PMA-differentiation-of-U937-cells

(無題) 削除/引用
No.9913-3 - 2021/09/15 (水) 19:37:57 - Sam
アドバイスありがとうございます。

やはり、FBSの濃度は下げているのですね。飢餓状態がいいという話がありましたので、検討しようと思っていました。

形態は球状から癌培養細胞が接着したようなやや透明な状態になりましたか？論文を見ると癌細胞のように、結構長い仮足が出ているようなデータもあれば少しだけ球に歪みが出ている程度の論文もありました。

どれくらいの割合が接着して生存しますか？昔の文献を見ると8割、9割と言った驚異的な数字の論文もありました。貪食率もかなり高いでしょうか？

(無題) 削除/引用
No.9913-2 - 2021/09/15 (水) 18:10:58 - にゅーろとろふぃん
分化条件の検討は行いましたか？
細胞、難しいですよね。

細胞種によって分化に最適なFBS濃度、播種数、PMA濃度、分化時間は異なると思います。
また、同じ細胞種でも各ラボによって最適条件は異なるでしょう。

条件を振って、地道に1項目ずつ検討するのが一番の近道だと思いますよ。
土台が不安定だと、この先の実験にも影響しますし。
ただ、100ng/mLはおっしゃるとおり濃いような気がします。

うちの系では
5％FBS、PMA20ng/mL、48時間インキュベートで分化します。
形態的にMΦ様になっていますし、MΦマーカーの発現もリアルタイムPCRで分析すると未分化U937細胞と比較してかなり増加しています。

参考になれば幸いです。


同じ細胞を使う者同士、Samさんの実験が上手くいくことを願っています。

U937をマクロファージに分化させたい 削除/引用
No.9913-1 - 2021/09/14 (火) 21:30:53 - Sam
U937をマクロファージに分化させたいと考えています。

過去の文献を読んで、もっとも一般的に見えた100ng/mlのPMAをRPMI+10%FBSに添加して、2日培養したのですが、5%ほどしか細胞が接着しません。

形態も論文と異なり、球状で、ディッシュにくっついていて、癌細胞のような形態変化を示しません。

貪食能も低いです。何かアドバイスありますでしょうか。PMAの濃度に関しては、3ug/mlの方もごく少数いるので、現在増量を試みているのですが、逆に100ng/mlだと濃すぎて毒性が出ている可能性もあるのかなと愚考しています。

あるいは細胞自体に問題があるのでしょうか。。。簡単に思えた細胞の準備に苦労しています。
全5件 ( 1 〜 5 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する
名前 
メール  　アドレス非公開
   タイトル 
本文      
設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます）
上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません）
解決（問題が解決した際にチェックしてください）
暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。
送信 
〔使い方〕
  • 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。
  • 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。
  • 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。