Bio Technical フォーラム

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BRET トピック削除
No.9876-TOPIC - 2021/08/25 (水) 02:28:23 - パン屋
GPCRにルクシフェラーゼ、GPCRのリガンドにGFPをつけて、GPCR-リガンドの相互作用をBRET解析で見たいと思っています。素人です。

論文を見ているとGFPのほかにYFPを用いているものもあるのですが、このGFPかYFPの選択基準はなんでしょうか？素人なのでご教授いただけますと助かります。
また、BRETの結果からsilicoモデルを用いて構造を想定している論文を見かけますが、ほとんど原理の記載がありません。機械が見積もった程度の認識なのでしょうか？

なおGPCRはクラスAです。
　
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(無題) 削除/引用
No.9876-2 - 2021/08/25 (水) 07:05:26 - おお
原理は想像しやすいと思いますが、、、
要するにLucの発光スペクトラムが蛍光タンパクの吸収する波長（励起光の波長）とあっているか、蛍光タンパクのemissionの波長がLucの発光とどの程度重なるかという話だと思います。

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC15108/
このLucの発光特性や蛍光タンパクの吸収、蛍光スペクトラムを見比べてどのようなチョイスがベターなのか考えてみるといいでしょう。

ちなみに蛍光タンパクの方は、
http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/articles/probes/jellyfishfps.html

BRET 削除/引用
No.9876-1 - 2021/08/25 (水) 02:28:23 - パン屋
GPCRにルクシフェラーゼ、GPCRのリガンドにGFPをつけて、GPCR-リガンドの相互作用をBRET解析で見たいと思っています。素人です。

論文を見ているとGFPのほかにYFPを用いているものもあるのですが、このGFPかYFPの選択基準はなんでしょうか？素人なのでご教授いただけますと助かります。
また、BRETの結果からsilicoモデルを用いて構造を想定している論文を見かけますが、ほとんど原理の記載がありません。機械が見積もった程度の認識なのでしょうか？

なおGPCRはクラスAです。
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