Bio Technical フォーラム

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マイクロプレートリーダーのフィルター トピック削除
No.9840-TOPIC - 2021/08/06 (金) 13:32:05 - マイクロ
とある定量キットにて、マイクロプレートリーダーで560nmの吸光度を計測とあるのですが、うちのラボには近いものだと570nmの吸光度フィルターしかありません。他には505もあります。この場合、570では測ることは難しいでしょうか。正確にこしたことはないですが、ある程度、傾向を掴めれば良いと思っています。

詳しい人が近くにおらず困っています。

よろしくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.9840-3 - 2021/08/06 (金) 20:31:00 - あの
Google で画像を検索すると、判りやすい情報を得られることもあります。
たとえば、
 BCA protein assay wave length
で検索して、検索された画像を表示させると、次のようなページが出て、
 https://www.researchgate.net/figure/UV-vis-spectra-of-the-BCA-Cu-complex-at-increasing-concentrations-of-BSA-50-mg-mL-A1_fig7_232705101

自分の測定系で使えそうかどうか判断できる。

試薬メーカーに聞くという方法もあるけど、
実際には、どの程度の色がでるかはわからないから、
実験してみるしかない。

(無題) 削除/引用
No.9840-2 - 2021/08/06 (金) 15:20:31 - G25
半値幅ってご存知?

フィルターの使用によりますけれど、大抵のフィルターは半値幅が10-20 nmくらいあるわけです。
例えば570 nmで半値幅20 nmのフィルターだと、ピークの570 nmの透過率に対して、長波長側にずれて透過率が1/2 になる波長と短波長側にずれて透過率が1/2 になる波長の間に20 nmの幅があるってことです。単純に透過率の変化が長波長側と短波長側でシンメトリーだとすると、ピークから10 nm離れると透過率が1/2になるということです。透過率が1/2になると検出される強度は1/2になります。しかし、1/2になった透過率をブランクとして試料の透過率との差分を測定するのだから、測定には差し支えない。大抵の目的では、半値幅程度のズレは許容されていると思います。
半値幅からさらにずれて透過率がもっとさがったとしても、感度が取れる限り測定は可能。もちろん外れすぎて透過率がゼロに近くなっては使い物になりません。

その装置、あるいはフィルターの仕様書を見て、波長特性を確認しておくといいでしょう。

マイクロプレートリーダーのフィルター 削除/引用
No.9840-1 - 2021/08/06 (金) 13:32:05 - マイクロ
とある定量キットにて、マイクロプレートリーダーで560nmの吸光度を計測とあるのですが、うちのラボには近いものだと570nmの吸光度フィルターしかありません。他には505もあります。この場合、570では測ることは難しいでしょうか。正確にこしたことはないですが、ある程度、傾向を掴めれば良いと思っています。

詳しい人が近くにおらず困っています。

よろしくお願いします。

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