Bio Technical フォーラム

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DNA抽出法の変法 トピック削除
No.9838-TOPIC - 2021/08/05 (木) 19:08:53 - am
ある細胞内の分画に存在しているDNAの修飾を解析したいと考えています。

核内DNAを除くために、タンパク質分画キットを用いて、分画した後、DNAを抽出したいと考えています。

方法論に関しては散々と予備実験と議論して決定したことですので、ここまでの方法に関しては、できれば触れないでいただければと考えています。

何段階か経て、回収した分画はcell lysis solution等を含むと思いますが、このサンプルから、DNAを抽出したいと考えています。

Cell lysis solutionその他の液の成分はブラックボックスなのですが、この状態からDNA抽出するためにはどういったDNA抽出試薬と組み合わせるのがいいのでしょうか?

まずは、RNaseを加えるとして、そのままphenol/chroloformや既存のkitに持ち込むことは可能でしょうか?
 
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(無題) 削除/引用
No.9838-2 - 2021/08/06 (金) 01:04:58 - おお
フェノールクロロフォルム、エタ沈で対処できます。
多分、他のキットも使えると思いますが、細胞から取るものは細胞を回収したものが材料になるので、あなたのサンプルのような液量のあるものは使いにくいと思います。また、キットはターゲットのDNAのサイズにより色々工夫されているようなので、ゲノム用だと小さいDNAがどの程度回収できるのかとか、色々確認しておくことが多くなると思います。

そのたウイルスゲノムやミトコンドリアDNAの回収といったプロトコールは参考になるかもしれません。

DNA抽出法の変法 削除/引用
No.9838-1 - 2021/08/05 (木) 19:08:53 - am
ある細胞内の分画に存在しているDNAの修飾を解析したいと考えています。

核内DNAを除くために、タンパク質分画キットを用いて、分画した後、DNAを抽出したいと考えています。

方法論に関しては散々と予備実験と議論して決定したことですので、ここまでの方法に関しては、できれば触れないでいただければと考えています。

何段階か経て、回収した分画はcell lysis solution等を含むと思いますが、このサンプルから、DNAを抽出したいと考えています。

Cell lysis solutionその他の液の成分はブラックボックスなのですが、この状態からDNA抽出するためにはどういったDNA抽出試薬と組み合わせるのがいいのでしょうか?

まずは、RNaseを加えるとして、そのままphenol/chroloformや既存のkitに持ち込むことは可能でしょうか?

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