Bio Technical フォーラム

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DNAの純度 UV測定 トピック削除
No.982-TOPIC - 2012/10/01 (月) 18:41:11 - DNA純度
DNAの純度測定をA260/A280 で評価しています
しかし、購入した試薬でもこの比が1.8以上になりません
DNAの濃度が低いと、この測定はできないものでしょうか?
ちなみに、UVスペクトルは、よく機器の説明にあるような
A260で明確なピークが観測されず、すこし盛り上がったのは確認できる程度です

微量のDNAの純度を測定する方法がほかにあるものでしょうか?
 
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御礼 解決済み 削除/引用
No.982-7 - 2012/10/02 (火) 08:23:07 - DNA純度
皆様
お忙しい中、ご返答ありがとうございました
アドバイスをもとにもう一度実験します

御礼まで

(無題) 削除/引用
No.982-6 - 2012/10/02 (火) 00:28:32 - おお
フォトミーターのフォルダーのスリットより幅の狭いキュベットで測定していると全然違う数字が出たりしますね。

(無題) 削除/引用
No.982-5 - 2012/10/01 (月) 23:32:09 - 直輝
7.5ng/μLということは、A260=0.15ODなので、十分測れる範囲だと思います。260nmに明確なピークが観察されるはずです。

・サンプルの液量が足りなくて、光路に届いていない
・サンプルホルダーの位置がずれていて、光路に届いていない
・DNAの濃度計算を間違っていて、実は7.5ng/μLではない
・キュベットの入れる向きを間違えている
などの可能性はありませんか?

(無題) 削除/引用
No.982-4 - 2012/10/01 (月) 22:21:09 - おお
7.5 ng /μLが最終濃度ならはかれなくはないですよ、たいていのフォトミーターだと。フォトミーターか手順を疑った方がいいのでは?

DNA純度 削除/引用
No.982-3 - 2012/10/01 (月) 20:53:57 - DNA純度
早速のご返答ありがとうございます
ご意見から判断するとDNAの濃度が低いのがやはり問題かと思いました
使用している濃度は7.5 ng /μLですので、やはりUVではっきりとスペクトルを確認するのは難しかったのかな?

購入した試薬とはDNAを購入したという意味でして(すいません、ややこしくて)TEに溶解しています

(無題) 削除/引用
No.982-2 - 2012/10/01 (月) 20:32:57 - KEN
どのような濃度のDNAでしょうか?購入した試薬とは何でしょうか?
一点確認ですが、何に溶かした核酸を確認しようとしているのでしょうか?
バッファーがTEや水なら良いのですが、ハイブリバッファーを初めバッファーによっては、正確に測定できないバッファーが多いです。
一度、精製後エタ沈で濃度を上げてそくてしてみればよいのではないでしょうか?
薄いといっても30ng/ulとかのレベルならば普通に測定できます。

DNAの純度 UV測定 削除/引用
No.982-1 - 2012/10/01 (月) 18:41:11 - DNA純度
DNAの純度測定をA260/A280 で評価しています
しかし、購入した試薬でもこの比が1.8以上になりません
DNAの濃度が低いと、この測定はできないものでしょうか?
ちなみに、UVスペクトルは、よく機器の説明にあるような
A260で明確なピークが観測されず、すこし盛り上がったのは確認できる程度です

微量のDNAの純度を測定する方法がほかにあるものでしょうか?

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