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(無題) 削除/引用 No.9817-2 - 2021/07/26 (月) 22:10:25 - ema 分解していると判断のは分解したRNAはそれなりの量検出できているのですね。何も検出できないのなら取れていない可能性もあります。 そのままの抽出でコラーゲンなどで回収しにくいというのはありました。真皮と表皮を分離したことはないですが、RNAlater,NucleoProtect RNAなどの 安定化剤処理をしてはうまく剥がれないのでしょうか。 https://www.promega.co.jp/litDB/pn000105.pdf 後大変かもしれませんが、すぐに凍結して、薄切しエタノール固定などで乾燥させ酵素を止め、レーザーマイクロダイセクションで真皮と表皮を分けるというのは。

表皮シートのRNA抽出での、RNA分解について 削除/引用 No.9817-1 - 2021/07/22 (木) 17:51:40 - なお マウス耳介の表皮のRNA抽出を行なっています。表皮での遺伝子発現をみたいので、RNA抽出前に真皮と表皮を分ける必要があります。耳介を採取後、背側と腹側に2分割し、真皮側をチオシアン酸アンモニウム入りPBSに浸して37℃で30分インキュベートして表皮と真皮を分離していますが、この過程でRNAが分解してしまっているようです。RNA分解を防ぐアウリントリカルボン酸を加えても、表皮まで浸透していかないのか、RNA分解を防げませんでした。分解を防いで表皮のRNAを抽出する方法について、詳しい方いらっしゃいましたら、ご意見頂けると助かります！

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