Bio Technical フォーラム

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マイクロプレートリーダーで蛍光を検出さる際の結果の解釈 トピック削除
No.9760-TOPIC - 2021/06/20 (日) 07:42:11 - KEN
免疫細胞と腫瘍細胞の関係性を明らかにするために、培養細胞を用いてアッセイを計画しています。

元の実験系は少し複雑なので簡略化して説明します。

2群に分けて比較解析を行っていて、アウトプットは、マイクロプレートリーダーで得る予定です。

2群のうち1群は、色素沈着を持つ細胞を多数混在させています(検出予定のターゲット細胞とは別に)。この細胞自体が蛍光を発することがないことは確認できているのですが、色素沈着を持つような細胞があると、蛍光の散乱や遮蔽が起きて、蛍光強度が低下するようなことはあるのでしょうか?

蛍光が色素という黒い紙でマスクされたのと同じ状態なのではないかと危惧しています。

あるいはマイクロプレートリーダーというのは、そういったことがほぼ無視できる機器なのでしょうか?お金がかかるので、予備実験は極力避けたい状況です。貧乏研究室です。
 
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(無題) 削除/引用
No.9760-3 - 2021/06/28 (月) 11:45:21 - tts
細胞を培養したプレートをリーダーで読み取る場合には、色素の有無にかかわらず細胞が結果に多分に影響します。

私はよく実施するのは、細胞を反応させた後、培地を除き、細胞溶解バッファーを添加、遠心して上清を別のプレートに回収して、それを測定するという方法です。
今回用いる実験でこういった方法を取ることができるのか、採用できたとして蛍光物質が溶解バッファーに安定なのかと言った問題もありますが、参考になれば幸いです。

(無題) 削除/引用
No.9760-2 - 2021/06/20 (日) 17:30:47 - あの
蛍光顕微鏡か共焦点顕微鏡で、自分で観察して、
データをとっておく方が良いと思います。

いざ論文投稿する際に、自分でも気づくリスクは
レフェリーも気づく可能性が高いですから。

間違った結論に到達する可能性もあるでしょうし。

マイクロプレートリーダーで蛍光を検出さる際の結果の解釈 削除/引用
No.9760-1 - 2021/06/20 (日) 07:42:11 - KEN
免疫細胞と腫瘍細胞の関係性を明らかにするために、培養細胞を用いてアッセイを計画しています。

元の実験系は少し複雑なので簡略化して説明します。

2群に分けて比較解析を行っていて、アウトプットは、マイクロプレートリーダーで得る予定です。

2群のうち1群は、色素沈着を持つ細胞を多数混在させています(検出予定のターゲット細胞とは別に)。この細胞自体が蛍光を発することがないことは確認できているのですが、色素沈着を持つような細胞があると、蛍光の散乱や遮蔽が起きて、蛍光強度が低下するようなことはあるのでしょうか?

蛍光が色素という黒い紙でマスクされたのと同じ状態なのではないかと危惧しています。

あるいはマイクロプレートリーダーというのは、そういったことがほぼ無視できる機器なのでしょうか?お金がかかるので、予備実験は極力避けたい状況です。貧乏研究室です。

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